[发明专利]含有靶向基团及荧光基团的[12]aneN3类阳离子脂质、转基因载体及其制备方法

权利要求书

1.一种含有靶向基团及荧光基团的[12]aneN3类阳离子脂质，所述阳离子脂质的结构式如下：

2.一种制备权利要求1所述的阳离子脂质的方法，其合成路线如下：

所述方法具体步骤包括：

步骤一、按比例称取式3化合物、式2化合物、催化剂1-羟基苯并三唑、缩合剂1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸和有机碱，加入溶剂二甲基亚砜溶解，在氮气氛围下反应8～10小时，反应结束后，减压浓缩，柱层析分离得到式4化合物；

步骤二、所述步骤一得到的式4化合物与癸二胺在乙二醇单甲醚溶剂中回流，反应结束后，冷却、过滤、洗涤与柱层析分离得到式5化合物；

步骤三、将所述步骤二得到的式5化合物、催化剂1-羟基苯并三唑、缩合剂1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸、式6化合物与有机碱加入无水N,N-二甲基甲酰胺溶剂，在氮气氛围下反应8～10小时，反应结束后，减压浓缩，柱层析分离得到式7化合物；

步骤四、将所述步骤三得到的式7化合物、式8化合物溶于四氢呋喃溶剂中得四氢呋喃溶液，将溶有硫酸铜和Vc-Na的水溶液加入所述四氢呋喃溶液中，室温下反应8～10小时，反应结束后，加入水，二氯甲烷萃取，柱层析分离得到式9化合物；

步骤五、将所述步骤四得到的式9化合物加入到氯化氢的饱和乙酸乙酯溶液中，室温搅拌反应，析出固体，然后将固体过滤，得到式1化合物阳离子脂质。

3.如权利要求2所述的方法，其中，在所述步骤一中，所述式2化合物和所述式3化合物的物质的量的比为1:1，所述有机碱为N,N-二异丙基乙胺，柱层析分离中采用的洗脱剂为二氯甲烷和甲醇，二氯甲烷和甲醇的体积比为20:1。

4.如权利要求2所述的方法，其中，在所述步骤二中，所述式4化合物与所述癸二胺的摩尔比为1:5.3，回流时间为20小时，所述柱层析分离中采用的洗脱剂为二氯甲烷和甲醇，二氯甲烷和甲醇的体积比为10:1。

5.如权利要求2所述的方法，其中，在所述步骤三中，所述有机碱为N,N-二异丙基乙胺，柱层析分离中采用的洗脱剂为二氯甲烷和甲醇，二氯甲烷和甲醇的体积比为10:1。

6.如权利要求2所述的方法，其中，在所述步骤四中，所述四氢呋喃溶液中的四氢呋喃和所述水溶液中的水的体积比为2:1，柱层析分离中采用的洗脱剂为二氯甲烷和甲醇，二氯甲烷和甲醇的体积比为10:1。

7.一种转基因载体，由权利要求1所述的阳离子脂质、二油酰磷脂酰乙醇胺和高纯灭菌缓冲液组成。

8.如权利要求7所述的转基因载体，其中，所述阳离子脂质的摩尔浓度为1.0mM，所述阳离子脂质与所述二油酰磷脂酰乙醇胺的摩尔比为1:2。

9.一种制备权利要求7所述的转基因载体的方法，所述方法具体包括步骤：将所述阳离子脂质、二油酰磷脂酰乙醇胺与无水氯仿加入到高温灭菌的烧瓶中，溶解后减压浓缩得到脂质体膜，将所述脂质体膜真空干燥去除残留氯仿，干燥后的脂质体膜与预先预热到70℃的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液混合配成所需浓度的溶液，超声得到所述转基因载体。

10.权利要求1所述的阳离子脂质在制备转基因载体中的应用。