[发明专利]乳粉中低聚半乳糖的高效液相色谱串联质谱检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及乳粉中低聚半乳糖的定量检测，尤其涉及乳粉中低聚半乳糖的高效液相色谱串联质谱检测方法。

背景技术

棉籽糖、水苏糖、毛蕊花糖是α-1,6糖苷键连接的低聚半乳糖(Galactooligosaccharides，GOS)，由于它们富含于大豆中，也常被称为大豆低聚糖。棉籽糖的分子结构是蔗糖靠近葡萄糖一侧以α-1,6糖苷键连接一个半乳糖，属于三糖；水苏糖是棉籽糖靠近半乳糖一侧以α-1,6糖苷键连接一个半乳糖，属于四糖；而毛蕊花糖则是在水苏糖末端半乳糖再以α-1,6糖苷键连接一个半乳糖，属于五糖。

棉籽糖、水苏糖、毛蕊花糖具有促进肠道有益菌生长，促进消化吸收，改善脂质代谢，降低血脂和胆固醇，促进钙和镁等矿物元素的吸收，提高免疫力等生理功能，因此常被添加到各类功能性食品中。尤其是在婴幼儿乳粉中，往往人为添加低聚半乳糖，以模拟人乳中含有低聚半乳糖的状态，起到促进婴幼儿的消化吸收的作用。棉籽糖、水苏糖、毛蕊花糖是低聚半乳糖的重要组成品种。目前国内并没有完善成熟的乳粉中棉籽糖、水苏糖、毛蕊花糖的检测标准，这使得相关指标的监管缺失，不利于保障乳制品的质量安全。因此，开发乳粉中棉籽糖、水苏糖、毛蕊花糖的检测方法，具有重要的意义。

利用高效液相色谱配示差检测器或蒸发光散射检测器检测棉籽糖、水苏糖、毛蕊花糖已有一些文献报道。如目前国内已发布的国家标准GB/T22491-2008《大豆低聚糖》，标准中涉及了棉籽糖和水苏糖的检测方法。但现有方法存在如下缺陷：高效液相色谱检测方法的检出限一般在1mg/kg的数量级，示差检测器或蒸发光散射检测器不能对棉籽糖、水苏糖、毛蕊花糖进行准确定性，因此容易因为杂质干扰造成误差、误判；另外由于乳粉样品成分复杂，检测之前需要对样品进行预处理，乳粉样品的预处理方法严重影响检测结果的准确性，目前乳粉样品的预处理方法检测效果差。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明的目的是提供一种可以准确定性各种低聚半乳糖、检测结果更准确、检出限更低的乳粉中低聚半乳糖的高效液相色谱串联质谱检测方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

乳粉中低聚半乳糖的高效液相色谱串联质谱检测方法，包括以下步骤：

(1)制备标准溶液并进行高效液相色谱串联质谱检测

称取各种低聚半乳糖标准品并将其配成混合标准储备液；再将混合标准储备液用蒸馏水逐级稀释，分别配成至少5种不同浓度的混合标准溶液，将不同浓度的混合标准溶液进行高效液相色谱串联质谱检测并得到标准谱图，标准谱图中保留时间确定低聚半乳糖品种，色谱峰面积与对应的低聚半乳糖浓度成函数关系；

(2)将步骤(1)获得的标准谱图按低聚半乳糖品种分别制作浓度与色谱峰面积关系曲线图；

(3)乳粉样品进行预处理及高效液相色谱串联质谱检测；

称取乳粉样品，加入蒸馏水和无水乙醇溶解，涡旋振荡后，超声溶解，离心，取上清液稀释后过滤膜过滤，取滤液进行高效液相色谱串联质谱检测，得乳粉样品谱图；

(4)样品中的低聚半乳糖的含量的确定

将步骤(3)获得的样品谱图的保留时间确定低聚半乳糖品种并将其色谱峰面积代入步骤(2)对应的低聚半乳糖品种的标准曲线方程，计算样品中各种低聚半乳糖的含量。

优选的，在步骤(1)中的不同浓度的混合标准溶液浓度从50μg·L^-1至1500μg·L^-1分为6级，级间间隔由小至大大致倍增，每浓度级中各低聚半乳糖标准品含量相同。

优选的，在步骤(3)中，所述蒸馏水与无水乙醇的体积比可为3:2。

优选的，在步骤(3)中，样品的前处理的具体步骤如下：称取乳粉样品，加入体积比为3:2的蒸馏水和无水乙醇溶解，涡旋振荡后，超声溶解，在10℃下，以8000r·min^-1离心5min，取上清液稀释后采用0.22μm水相滤膜过滤。

在步骤(1)和(3)中，高效液相色谱串联质谱的实验条件如下：

色谱条件：

①色谱柱选用XBridgeTMAmide，3.5μm，4.6×150mm，进样量为5μL，柱温为40℃，流速为0.4mL·min^-1；

②流动相和洗脱程序如下：

流动相A：40/60乙腈/水(混合溶液含0.10％氨水)；

流动相B：70/30乙腈/水(混合溶液含0.10％氨水)；