[发明专利]乳粉中低聚半乳糖的高效液相色谱串联质谱检测方法

权利要求书

1.乳粉中低聚半乳糖的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)制备标准溶液并进行高效液相色谱串联质谱检测

称取各种低聚半乳糖标准品并将其配成混合标准储备液；再将混合标准储备液用蒸馏水逐级稀释，分别配成至少5种不同浓度的混合标准溶液，将不同浓度的混合标准溶液进行高效液相色谱串联质谱检测并得到标准谱图，标准谱图中保留时间确定低聚半乳糖品种，色谱峰面积与对应的低聚半乳糖浓度成函数关系；

(2)将步骤(1)获得的标准谱图按低聚半乳糖品种分别制作浓度与色谱峰面积关系曲线图；

(3)乳粉样品进行预处理及高效液相色谱串联质谱检测；

称取乳粉样品，加入蒸馏水和无水乙醇溶解，涡旋振荡后，超声溶解，离心，取上清液稀释后过滤膜过滤，取滤液进行高效液相色谱串联质谱检测，得乳粉样品谱图；

(4)样品中的低聚半乳糖的含量的确定

将步骤(3)获得的样品谱图的保留时间确定低聚半乳糖品种并将其色谱峰面积代入步骤(2)对应的低聚半乳糖品种的标准曲线方程，计算样品中各种低聚半乳糖的含量。

2.如权利要求1所述乳粉中低聚半乳糖的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于在步骤(1)和(3)中，高效液相色谱串联质谱的实验条件如下：

色谱条件：

①色谱柱选用XBridgeTMAmide，3.5μm，4.6×150mm，进样量为5μL，柱温为40℃，流速为0.4mL·min^-1；

②流动相和洗脱程序如下：

流动相A为40/60乙腈/水的混合溶液，混合溶液中含0.10％氨水；

流动相B：70/30乙腈/水的混合溶液，混合溶液中含0.10％氨水；

0～0min，流动相A从0到40％，流动相B从100％到60％；

30～33min，流动相A从40％到60％，流动相B从60％到40％；

33～35min，流动相A保持60％，流动相B保持40％；

35～37min，流动相A从60％到0，流动相B从40％到100％；

质谱条件：离子化方式为电喷雾电离；扫描方式为负离子扫描；检测方式为多反应监测。

3.如权利要求1所述乳粉中低聚半乳糖的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于在步骤(1)中的不同浓度的混合标准溶液浓度从50μg·L^-1至1500μg·L^-1分为6级，级间间隔由小至大大致倍增，每浓度级中各低聚半乳糖标准品含量相同。

4.如权利要求1所述乳粉中低聚半乳糖的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于在步骤(3)中，所述蒸馏水与无水乙醇的体积比为3:2。

5.如权利要求1所述乳粉中低聚半乳糖的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于在步骤(3)中，样品的前处理的具体步骤如下：称取乳粉样品，加入体积比为3:2的蒸馏水和无水乙醇，涡旋振荡后，超声溶解，在10℃下，以8000r·min^-1离心5min，取上清液稀释后采用0.22μm水相滤膜过滤。