[发明专利]一种猪乙型脑炎病毒抗体阳性血清的制备方法

说明书

本发明提供了一种猪乙型脑炎病毒抗体阳性血清的制备方法，该方法包括疫苗的制备、阴性猪的筛选、免疫接种、阳性血清的收获及鉴定。本发明首先通过猪乙型脑炎活疫苗(SA14‑14‑2株)进行对阴性猪进行基础免疫，然后使用经浓缩纯化技术制备的高效价的猪乙型脑炎灭活疫苗(SA14‑14‑2株)进行强化免疫制备猪乙型脑炎病毒抗体阳性血清。以本发明制备的猪乙型脑炎病毒抗体阳性血清，相对于使用乙脑强毒制备阳性血清，避免了使用强毒的风险，具有安全性高的优点；同时使用猪制备阳性血清较小鼠收获的血清量大，相对成本较低，具有突出的规模化应用前景。

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，具体涉及一种猪乙型脑炎病毒抗体阳性血清的制备方法。

背景技术

流行性乙型脑炎是由黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)的乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus，JEV)引起的一种人兽共患虫媒性传染病。猪感染乙型脑炎形成病毒血症，被认为是人类乙型脑炎流行的主要传染源，因此，防制猪乙型脑炎不但可以减少养猪业的损失，而且也是预防人患乙型脑炎的重要措施。其主要引起母猪和公猪的繁殖障碍，主要表现为怀孕母猪流产、死胎、产弱仔、公猪睾丸炎等，常常给养猪业造成严重的经济损失。

疫苗是预防该病的主要方法之一。目前，我国商品化的猪乙型脑炎疫苗主要是鼠脑灭活疫苗和弱毒疫苗，为保证疫苗的特异性和纯净性，鉴别检验和外源病毒检验为该疫苗质量检验的必检项目。目前，猪乙型脑炎病毒抗体阳性血清主要应用于猪乙型脑炎活疫苗的鉴别检验、外源病毒检验以及诊断检测等用途。

目前尚未见有猪乙型脑炎病毒抗体阳性血清制备方法的报道。一般高免血清的制备方法为：首先使用疫苗或弱毒株进行基础免疫，然后使用强毒进行强化免疫以刺激机体产生强免疫应答，获取高免血清，如猪瘟高免血清的制备方法。猪乙型脑炎作为人兽共患传染病，采用强毒攻击，制备环节中对于人的防护及攻毒设施要求较高，并对人类健康存在较大的潜在威胁。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种猪乙型脑炎病毒抗体阳性血清的制备方法，以解决现有技术中缺乏相关方法的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是猪乙型脑炎病毒抗体阳性血清制备环节安全性较低。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种猪乙型脑炎病毒抗体阳性血清的制备方法，包括以下步骤：

1)制备猪乙型脑炎疫苗；

2)取步骤1)所述疫苗对猪瘟病毒及其抗体、猪繁殖与呼吸综合征病毒及其抗体、猪伪狂犬病毒及其抗体、猪圆环Ⅱ型病毒及其抗体均呈阴性的猪进行免疫接种；

3)从步骤2)免疫接种后的猪体内收获血清；

在此基础上，步骤1)所述疫苗是以猪乙型脑炎病毒SA14-14-2株为抗原制备的。

作为优选，步骤2)所述的猪是2～3月龄健康猪，其猪乙型脑炎HI效价不高于1:4。

作为优选，步骤2)所述的免疫接种方法为：

A)基础免疫：取步骤1)制备的猪乙型脑炎活疫苗，每次以1～5头份的剂量注射2次，每次间隔13～17d；

B)强化免疫：基础免疫13～17d后，取步骤1)制备的猪乙型脑炎灭活疫苗，以肌肉注射的方式接种3～5次，相邻两次接种的时间间隔为7～10d，后一次接种的剂量是前一次接种剂量的1.5～2倍。

在此基础上进一步优选的，步骤B)中首次注射的剂量为3～5mL。

作为优选，步骤3)中所述血清的中和抗体效价高于1:400。