[发明专利]一种猪乙型脑炎病毒抗体阳性血清的制备方法

权利要求书

1.一种猪乙型脑炎病毒抗体阳性血清的制备方法，包括以下步骤：

1)制备猪乙型脑炎疫苗；

2)取步骤1)所述疫苗对猪瘟病毒及其抗体、猪繁殖与呼吸综合征病毒及其抗体、猪伪狂犬病毒及其抗体、猪圆环Ⅱ型病毒及其抗体均呈阴性的猪进行免疫接种；

3)从步骤2)免疫接种后的猪体内收获血清；

其特征在于：步骤1)所述疫苗是以猪乙型脑炎病毒SA14-14-2株为抗原制备的；

同时：

步骤2)所述的猪是2～3月龄健康猪，其猪乙型脑炎HI效价不高于1:4；

步骤2)所述的免疫接种方法为：

A)基础免疫：取步骤1)制备的猪乙型脑炎活疫苗，每次以1～5头份的剂量注射2次，每次间隔13～17d；

B)强化免疫：基础免疫13～17d后，取步骤1)制备的猪乙型脑炎灭活疫苗，以肌肉注射的方式接种3～5次，相邻两次接种的时间间隔为7～10d，后一次接种的剂量是前一次接种剂量的1.5～2倍；

步骤B)中首次注射的剂量为3～5mL。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤3)中所述血清的中和抗体效价高于1:400。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤1)所述的疫苗包括猪乙型脑炎活疫苗，其猪乙型脑炎病毒滴度高于10^6.0TCID₅₀/头份。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤1)所述的疫苗包括猪乙型脑炎灭活疫苗，该疫苗是将猪乙型脑炎病毒液进行超滤浓缩纯化后，使用β-丙内酯灭活，再使用ISA760VG佐剂进行乳化制备得到的；其中超滤浓缩的孔径是300KD，浓缩倍数是5～10倍。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤1)所述的疫苗包括猪乙型脑炎灭活疫苗，该疫苗的效价高于10^9.0TCID₅₀/ml。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤1)所述的疫苗包括猪乙型脑炎灭活疫苗，该疫苗是将猪乙型脑炎病毒液进行超滤浓缩纯化后，使用β-丙内酯灭活，再使用ISA760VG佐剂进行乳化制备得到的；其中灭活包括以下步骤：以1:2000～1:8000的质量比向超滤浓缩后的猪乙型脑炎病毒液中加入β-丙内酯，于2～8℃灭活24～96h，而后置于35～39℃水浴水解1.5～2.5h。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤1)所述的疫苗包括猪乙型脑炎灭活疫苗，该疫苗是将猪乙型脑炎病毒液进行超滤浓缩纯化后，使用β-丙内酯灭活，再使用ISA760VG佐剂进行乳化制备得到的；其中猪乙型脑炎病毒液与ISA760VG佐剂的混合比例为1:2～1:3，乳化时间5～10min。