[发明专利]一种1日龄肉鸡用禽流感病毒冻干灭活疫苗制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及一种1日龄肉鸡用禽流感病毒冻干灭活疫苗制备方法。

背景技术

禽流感(AvianInfluenza)是由甲型流感病毒引起的一种禽类烈性传染病，被国际兽疫局定为Ⅰ类传染病。本病发病急骤，一旦感染将给养殖业带来重大的经济损失，成为危害畜牧业发展的重大疫病之一。疫苗免疫接种是预防本病的有效措施。

目前大量使用的是鸡胚生产的全病毒油乳剂灭活疫苗，使用矿物油佐剂，该疫苗难于吸收，免疫剂量较大，并且病毒需要浓缩后制备疫苗。另外，肉鸡具有较高的母源抗体，从而限制了油乳剂疫苗的免疫效果。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种1日龄肉鸡用禽流感病毒冻干灭活疫苗制备方法，以解决现有技术的油乳剂灭活疫苗所需免疫剂量较大的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是现有技术的禽流感病毒疫苗的免疫效果，受鸡的母源抗体影响较严重。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种1日龄肉鸡用禽流感病毒冻干灭活疫苗制备方法，包括以下步骤：

1)病毒培养；

2)病毒灭活；

3)将步骤2)灭活后的病毒液与细胞因子IFN-γ以1:1～5:1的比例混匀得到病毒混合液，使得其中细胞因子IFN-γ的含量为100～500μg/mL，而后冷冻干燥得到所述冻干灭活疫苗。

作为优选，步骤1)所述的病毒培养包括以下步骤：

A)将禽流感病毒毒种进行10倍梯度稀释，分别取10^-8、10^-9、10^-10、10^-11稀释度的毒种溶液接种鸡胚，而后收集感染病毒的鸡胚尿囊液；

B)在全部感染病毒的鸡胚中选取所注射毒种溶液稀释倍数最大的鸡胚的尿囊液，即为传代用病毒液；

C)利用步骤B)所述的传代用病毒液，重复以上步骤A、B3～5次，取HA效价排名前10～20％的鸡胚尿囊液作为种子批，将该种子批按10^-4稀释度进行稀释，接种鸡胚，得到的尿囊液即为灭活前病毒液，用于步骤2)灭活。

作为优选，步骤A)中用于接种鸡胚的毒种溶液剂量为0.1mL。

作为优选，步骤A)接种鸡胚后，将鸡胚于37℃孵育，而后收集感染病毒的鸡胚尿囊液。

作为优选，步骤A)中所述感染病毒的鸡胚是接种后24～96h死亡胚或96h时未死胚。

作为优选，步骤A)中对鸡胚是否感染病毒是通过以下方法确定的：测定鸡胚尿囊液的HA效价，HA效价≥(1:256)的鸡胚是感染病毒的鸡胚。

作为优选，步骤C)中所述灭活前病毒液中禽流感病毒含量为10^-9.1EID₅₀/0.1mL。

作为优选，步骤2)中病毒灭活方法为：向灭活前病毒液中加入甲醛至终浓度为0.5～2‰(v/v)，20～25℃条件下灭活12～24小时。

作为优选，步骤3)中所述的冷冻干燥，以蔗糖脱脂乳作为冻干保护剂。

作为优选，步骤3)中病毒混合液与冻干保护剂的混合比例为1:0.5～1:1.5。

本发明意在利用细胞因子IFN-γ作为佐剂，并且将其与抗原混合后冻干，从而起到浓缩抗原的作用，可以通过控制稀释液的体积减少疫苗的免疫剂量，从而提供一种安全、有效的禽流感病毒冻干灭活疫苗。效力检验结果证明利用本发明方法制备的禽流感病毒冻干灭活疫苗能够使鸡较早产生抗体，可以克服肉鸡母源抗体的干扰，能够达到较好的免疫效果。同时本发明制备的疫苗免疫剂量小，疫苗能够充分吸收，安全性好。该发明制备的疫苗利用冻干的方法浓缩病毒，简化了疫苗制备的操作程序，降低了病毒的损失。

附图说明

图1是本发明实施例1中HI抗体检测结果图。

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。