[发明专利]一种1日龄肉鸡用禽流感病毒冻干灭活疫苗制备方法

权利要求书

1.一种1日龄肉鸡用禽流感病毒冻干灭活疫苗制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)病毒培养；

2)病毒灭活；

3)将步骤2)灭活后的病毒液与细胞因子IFN-γ以1:1～5:1的比例混匀得到病毒混合液，使得其中细胞因子IFN-γ的含量为100～500μg/mL，而后冷冻干燥得到所述冻干灭活疫苗。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤1)所述的病毒培养包括以下步骤：

A)将禽流感病毒毒种进行10倍梯度稀释，分别取10^-8、10^-9、10^-10、10^-11稀释度的毒种溶液接种鸡胚，而后收集感染病毒的鸡胚尿囊液；

B)在全部感染病毒的鸡胚中选取所注射毒种溶液稀释倍数最大的鸡胚的尿囊液，即为传代用病毒液；

C)利用步骤B)所述的传代用病毒液，重复以上步骤A、B3～5次，取HA效价排名前10～20％的鸡胚尿囊液作为种子批，将该种子批按10^-4稀释度进行稀释，接种鸡胚，得到的尿囊液即为灭活前病毒液，用于步骤2)灭活。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤A)中用于接种鸡胚的毒种溶液剂量为0.1mL。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤A)接种鸡胚后，将鸡胚于37℃孵育，而后收集感染病毒的鸡胚尿囊液。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤A)中所述感染病毒的鸡胚是接种后24～96h死亡胚或96h时未死胚。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤A)中对鸡胚是否感染病毒是通过以下方法确定的：测定鸡胚尿囊液的HA效价，HA效价≥(1:256)的鸡胚是感染病毒的鸡胚。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤C)中所述灭活前病毒液中禽流感病毒含量为10^-9.1EID₅₀/0.1mL。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤2)中病毒灭活方法为：向灭活前病毒液中加入甲醛至终浓度为0.5～2‰(v/v)，20～25℃条件下灭活12～24小时。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤3)中所述的冷冻干燥，以蔗糖脱脂乳作为冻干保护剂。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤3)中病毒混合液与冻干保护剂的混合比例为1:0.5～1:1.5。