[发明专利]一种血管生成抑制剂多肽HS-1及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，尤其是涉及一种血管生成抑制剂多肽HS-1及其应用。

背景技术

目前，癌症已经成为除心血管疾病之外的另一杀手，癌症的治疗方式主要以手术、化疗和放疗为主、但是化疗药物作用大多是不具有选择性的，广泛分布在体内各个器官，治疗剂量下对正常组织器官损害很大，虽然患者病情能得到暂时缓解，但是对于患者的生存质量有着严重的危害，并且疗效都不是很理想。因而开发具有肿瘤特异选择性的化疗药物成为了研究热点。

整合素受体(Integrin)为细胞黏附分子家族的重要成员之一，主要介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质(ECM)之间的相互作用，并介导细胞与ECM之间的双向信号传导。整合素受体是由α和β亚基以非共价键结合而形成的跨膜异二聚体糖蛋白，属于I型膜蛋白，迄今已发现由18种不同的α亚基和8种β亚基组成的24种整合素。

内皮抑素是能够抑制内皮细胞增殖的一类血管生成抑制剂。内皮抑素是胶原XVIII的C-端片段，分子量为20kD_a，能够特异性抑制内皮细胞的增殖和迁移，减少胶质细胞瘤血管和血流，有效抑制小鼠各种原发肿瘤。内皮抑素能够与整合素α5β1相互作用，预示着α5β1可能是endostatin的功能靶点。

发明内容

本发明的目的是提供一种血管生成抑制剂多肽HS-1，多肽HS-1对肿瘤细胞整合素受体具有特异选择性，有良好的应用前景，多肽HS-1由19个氨基酸组成，其序列为Ser-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Asp，本发明的19肽是在内皮抑素序列中的12肽序列Ser-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro基础上进行的改造，Gly-Arg-Asp(GRD)是与整合素受体配体RGD功能相似的肽序列，同样对肿瘤细胞有着特异选择功能，所以将12肽与靶向GRD结合起来，使HS-1具有了靶向性同时增强了抗肿瘤活性。

本发明的技术方案是：

一种血管生成抑制剂多肽HS-1，其氨基酸序列如序列表中SEQIDNO.1所示。

本发明的另一方面，血管生成抑制剂多肽HS-1在诊断、预防和治疗肿瘤中的应用。

本发明的另一方面，血管生成抑制剂多肽HS-1的合成方法，包括以下步骤：

1)偶联：先将芴甲氧羰酰基-天冬氨酸-rink氨基树脂溶胀于DMF中，接着用piperdine/DMF溶液脱去Fmoc保护基，用DMF洗涤脱帽子后的树脂，加入原料Fmoc-Arg(tBU)-OH，缩合剂用HBTU；kaiser法检偶联反应是否完成；重复上述操作，依次偶联Fmoc-Gly(OtBU)-OH，...FmocGly--OH；Fmoc-Pro(Boc)-OH；Fmoc-Val(Boc)-OH………..Fmoc-Ser(Pbf)-OH，完成所有直链肽合成后，用甲醇洗涤所得到的peptidylresin，真空干燥箱里充分干燥；

2)树脂与肽的分离裂解：

①裂解液的配制：裂解液的配比如下：

②裂解液配好后，混合均匀，放在冰箱里冷藏，然后将裂解液加入树脂中磁力搅拌，然后，将裂解液与树脂分离，弃去树脂，保留滤液，将滤液缓慢滴加到冰无水乙醚中，滴加完毕后，自然沉降，然后在高速离心机里离心，弃去上清液，保留沉淀，将所得沉淀在干燥箱中干燥，得到干粉粗品；

3)纯化：

取上述干粉粗品，用0.1％TFA/H2O溶解。经过滤后，上样到C18制备柱，用HPLC进行梯度洗脱，收集目标肽的洗脱液体。

本发明具有的优点和积极效果是：

1.本发明利用对整合素受体有特异亲和力的GRD肽片段与血管生成抑制蛋白内皮抑素的有效序列进行连接，形成了一组全新的多肽药物。

2.本发明通过多肽的固相合成得到HS-1。

3.产物在体内外的肿瘤摄取实验中体现了高效的肿瘤靶向能力，能够被整合素高表达细胞系特异吸收，起到靶向治疗的目的。

4.在体内药效实验中，本产品对比血管生成抑制剂内皮抑素在抑制肿瘤生长过程中有显著的提高，能够作为实体肿瘤的特效药物。

附图说明

图1是激光共聚焦实验观察RhB-HS-1与单独RhB对不同肿瘤细胞的摄取(A为U87MG细胞，B为MDA-MB-231细胞)