[发明专利]一种分离肉鸡粪便中洛克沙胂及其降解产物的方法

说明书

本发明公开一种分离肉鸡粪便中洛克沙胂及其降解产物的方法，该方法包括如下步骤：1)使用甲醇/水作为提取液对粪便样品进行提取；2)采用固相萃取柱进一步浓缩净化样品；3)采用外标法测定粪便样品中洛克沙胂的回收率。本发明提供的分离方法采用的是体积比为1:9的甲醇/水提取粪便样品中的洛克沙胂残留，可以获得较高的提取率。此外，本发明在采用固相萃取柱进一步净化样品时，使用体积比为5:65～75:20～30的甲酸/甲醇/水，pH为2的洗脱液既能保证获得理想的回收率，又能去除样品中的一些极性化合物杂质，以降低质谱检测中的背景干扰。本发明提供的分离方法的回收率能满足后续检测的要求。

技术领域

本发明涉及化学物质分离领域，具体涉及一种分离肉鸡粪便中洛克沙胂及其降解产物的方法。

背景技术

洛克沙胂(3-硝基-4-羟基苯砷酸，Roxarsone)是一种有机砷(As)化合物，因其具有抗菌和促生长效果，可作为添加剂在肉鸡饲料中使用。洛克沙胂在动物体内很少被降解，多是以原药的形式随粪便排出，进入环境产生严重的局部砷污染。在生态环境日趋恶化的今天，人们对有机砷制剂在环境中的降解、迁移以及对环境生物造成的影响越来越关注，洛克沙胂主要通过畜禽粪便进入环境，进入环境后，可能通过生物的或非生物的降解反应转变为迁移能力更强、毒性更大的含砷化合物，但迄今人们对这一过程还不甚了解。为了研究洛克沙胂随畜禽粪便排出后的迁移转化规律，评估洛克沙胂在环境中的残留状况与生态毒理学，急需建立一种快速准确的方法对洛克沙胂及其降解产物予以分析。

然而，前人的研究多着眼于总砷含量及无机砷形态的分析，如现有的关于砷测定的标准包括：土壤总砷测定的行业标准NY/T 1121.11-2006；水质砷测定的行业标准SL327.1-2005；食品添加剂中总砷测定的国家标准GB/T 5009.76-2003；稻米中总砷测定的行业标准NY/T 1099-2006；饲料中总砷测定的国家标准GB/T 13079-2006；以及食品中总砷及无机砷测定的国家标准GB/T 5009.11-2003，此外，与砷测定有关的专利包括：水产品中无机砷的测定方法(授权公告号：CN 101261258 B)等，上述方法均不涉及有机砷形态的分析测定。由于检测方法的不完善，导致洛克沙胂通过粪便进入环境后的降解途径尚不清楚。

有机砷及其降解产物均属极性化合物，其在复杂环境样品中的分析方法首选是高压液相色谱(HPLC)法，将HPLC的分离优势与串联质谱(MS/MS)的鉴别特异性结合，必能进一步提高检测的准确度与灵敏度。迄今已有部分利用HPLC-MS/MS检测有机砷化物的文献报道，但研究目标多为检测土壤和食品基质中的有机砷残留及其降解产物，而利用HPLC-MS/MS检测畜禽排泄物中洛克沙胂转化产物的研究相对较少。因粪便成分复杂，样品基质极大地影响待测化合物在质谱中的离子化，所以必须对样品进行必要的提取净化前处理，以减少基质干扰。在已报道的检测洛克沙胂含量的方法中曾采用甲醇或磷酸氢二钾溶液对猪粪和饲料样品进行提取，然后再用固相萃取柱净化，但是磷酸盐为不挥发盐，为了防止离子源内盐结晶的堆积污染，在质谱测定中不能使用无机磷酸盐溶液，其他有机提取溶剂运用到有机胂提取中效果均不理想，其中洛克沙胂的加标回收率很低，并不能满足检测要求，其原因可能是洛克沙胂与粪便样品中的金属离子等杂质相结合形成难提取物质，因此寻求一种能够高效分离回收肉鸡粪便中的洛克沙胂以及降解物的方法势在必行。

发明内容

本发明的一个目的是针对上述技术缺陷提供一种分离肉鸡粪便中洛克沙胂及其降解产物的方法，以期满足检测需求。

为实现上述目的，本发明首先提供了一种分离肉鸡粪便中洛克沙胂及其降解产物的方法，上述方法包括如下步骤：

1)使用甲醇/水作为提取液对粪便样品进行提取；

2)采用固相萃取柱进一步浓缩净化样品；

3)采用外标法测定粪便样品中洛克沙胂的回收率。

进一步地，上述步骤可优化为：