[发明专利]一种荧光探针NASA及其制备和应用

说明书

一种荧光探针NASA及其制备和应用。本发明提供了一种可用于检测体外S‑腺苷同型半胱氨酸水解酶(S‑adenosyl‑L‑homocysteine hydrolase,简称SAHH)的荧光探针。主要合成方法为在SAHH的作用部位腺苷上通过C‑S键连接1，8‑萘酰亚胺生成结构为的化合物；在SAHH作用下，生成利用反应前后荧光性质的差异实现对SAHH的检测，该探针可以用于定量血红细胞中SAHH含量，以及用于SAHH抑制剂的筛选。

技术领域

本发明涉及荧光探针领域，具体涉及一种可用于检测S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosyl-L-homocysteine hydrolase,简称SAHH)的荧光探针。在1，8-萘酰亚胺上引入腺苷分子，利用反应物与产物的荧光差别实现选择性地检测S-腺苷同型半胱氨酸水解酶。

背景技术

S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH,EC:3.1.3.1)是细胞内广泛存在的一种酶,它催化S-腺苷同型半胱氨酸(AdoHcy)水解生成腺苷和同型半胱氨酸。抑制SAHH将导致细胞内甲基化抑制物AdoHcy的堆积,从而对转甲基反应产生反馈性抑制作用。而甲基化对于维持细胞的活性是必需的。鉴于SAHH在调节生物体转甲基化反应中的核心地位,它已被选择作为多种新药研发的重要靶点,包括免疫抑制剂、抗病毒药、防治动脉粥样硬化和阿尔茨海默病药物。SAHH抑制剂全新的化学结构、良好的作用效果和独特的作用靶点已引起国内外研究者广泛的兴趣。

荧光探针是有效检测生命体内SAHH的手段之一，相比吸光度法具有检测灵敏的优势。一个具有应用前景的荧光探针应具有作用前后荧光变化明显、对目标分子响应快、选择性好、合成简单等优点。目前应用于检测SAHH的荧光探针寥寥无几，查阅只见利用S-腺苷同型半胱氨酸的代谢产物Hcy来间接检测SAHH的方法。因此开发对其SAHH的探针具有很大挑战性。

发明内容

本发明就是针对上述问题，提供了一种可用于选择性检测细胞内SAHH的荧光探针，此探针可以在生理条件下选择性地与SAHH作用，作用后荧光显著增强。

本发明采用如下技术方案：

本发明提供了一种可用于检测S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosyl-L-homocysteine hydrolase,简称SAHH)的荧光探针。主要合成方法为在SAHH的作用部位腺苷上通过C-S键连接1，8-萘酰亚胺；该化合物在SAHH作用下，生成4-巯基-1，8-萘酰亚胺，利用反应前后荧光性质的差异实现对SAHH的选择性检测。

合成的探针化合物的结构用代号NASA表示。

所述荧光探针的结构式Ⅰ如下。

所述的荧光探针的制备方法为：在SAHH的作用部位腺苷上通过C-S键连接1，8-萘酰亚胺；具体制备步骤如下，

1)在干燥THF50ml中加入三苯基膦(cas：603-35-0)3.76g，搅拌至全溶。冰浴条件下，5min内缓慢滴加偶氮二羧酸二乙酯(cas：1972-28-7)2.2ml。搅拌30min后，加入2',3'-异丙叉腺苷(cas：362-75-4)2.1g。维持0度搅拌10min。5min内缓慢滴加硫代乙酸(cas：507-09-5)1.0ml。0度反应1小时后，旋干溶剂，得到的黄色固体用柱层析(CHCl₂-MeOH,100:0,95:5,90:10)分离。得到化合物11.62g，产率为65％。

2)在20ml乙醇中，加入4-溴-1，8-萘酐(cas：81-86-7)1g与1-丁胺(cas：109-73-9)353uL，78度回流4小时。反应完后旋干溶剂，得到产物21.2g，产率100％。