[发明专利]一种水产饲料中同时测定有机砷和无机砷的方法

说明书

技术领域

本发明是一种水产饲料中同时测定有机砷和无机砷的方法，具体涉及水产饲料中无机砷和有机砷形态的分析和检测技术，属于水产饲料的检测技术领域。

背景技术

自1980年国际癌症机构将砷确定为致癌因子以来，到目前为止，砷已成为人们广泛关注的污染物之一。我们知道，砷是自然界广泛存在的一种元素，在地壳中自然丰度列位 20（大约是 3 mg/kg），在海水中列位 14，人体中列位 12。水环境中的砷主要来源于土壤沉积物，地表径流，火山活动产生的岩浆，以及含砷海洋生物的堆积。土壤中的砷主要来源于在农业和医药业大量长期使用的含砷杀虫剂、除草剂中以及矿物开采等滞留于土壤中。此外砷的化合物还存在于防腐剂、玻璃仪器制造、催化剂、食品添加剂和兽药等中。食物或水中微量的无机砷进入生物体之后，能与带巯基（SH）的酶生成稳定的螯合物，产生酶活性阻碍，使得很多的酶活性降低或消失，严重干扰细胞的生物功能、结构和正常代谢，从而引发了很多病变。

自然界中砷的主要化合物有亚砷酸盐 As(Ⅲ)，砷酸盐 As(Ⅴ)，一甲基砷酸 MMA，二甲基砷酸 DMA，砷甜菜碱 AsB 和砷胆碱AsC。然而，砷的毒性与其形态密切相关，一般而言，无机砷的毒性远大于有机砷。As(Ⅲ)的毒性比 As(Ⅴ)的毒性高10倍，比一甲基砷酸 MMA和二甲基砷酸 DMA高 70 倍。而 AsB 和 AsC 等大分子的有机砷化合物则基本无毒[54]。因此，砷的形态分析研究有着重要的现实意义。

现有专利文献CN101261258B（水产品中无机砷的测定方法，2011.02.18）揭示了一种使用高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱联用对水产品如海藻类样品中砷的形态分析和研究，能准确测定水产品种有剧毒的无机砷：砷酸盐As(Ⅴ)、亚硝酸盐As(Ⅲ)，准确测定其有低毒的MMA和DMA，从而给出更为准确可靠的生物学特性。该专利文献公开了As(Ⅴ)的最低检测限为2.2ng/ml，As(Ⅲ)的最低检测限为0.6 ng/ml，MMA的最低检测限为0.9 ng/ml，DMA的最低检测限为1.0 ng/ml。

发明内容

本发明的目的在于提供一种水产饲料中同时测定有机砷和无机砷的方法，本方法建立了高效液相色谱-冷蒸汽发生原子荧光系统测定水产饲料样品中砷形态的检测方法，水产饲料样品经干燥、粉碎、萃取等步骤处理后，直接注入高效液相色谱-冷蒸汽发生原子荧光系统进行分析，该方法不仅简单、快速，而且绿色、环境友好、准确、灵敏、抗干扰能力突出，尤其适用于淡水鱼饲料样品中痕量砷的形态分析。

本发明通过下述技术方案实现：一种水产饲料中同时测定有机砷和无机砷的方法，其特征在于：包括以下步骤：

A、将水产饲料作为检测样品，进行干燥、粉碎、萃取、离心后，提取上层清液过滤制得待测样品；

B、将待测样品配制成浓度为50～120μg/L的待测液后，使用高效液相色谱-冷蒸汽发生原子荧光系统进行检测，其检测条件满足：

进样量：50～150μL，

流动相：10～20mmol/L磷酸氢二铵，

流动相流速：0.8～1.2mL/min，

载气：Ar，

还原剂：质量体积比为1.5～2.5% 的KBH₄和0.2～0.5%的NaOH，

载流液：体积比为5～10% 的HCl。

本发明适用于谈水鱼饲料样品中痕量砷的形态分析，能同时检测出饲料样品中三价砷As(III)、二甲基砷DMA、一甲基砷MMA和五价砷As(V)的含量，其中，As(III)的检出限可达到0.02 mg/ kg，DMA的检出限可达到0.16mg/ kg，MMA的检出限可达到0.32 mg/ kg，As(V)的检出限可达到0.16mg/ kg。

在步骤B中，所述高效液相色谱-冷蒸汽发生原子荧光系统的检测条件还满足：空心阴极灯灯电流控制在80～120mA，光电倍增管负高压控制在260～300V，上述参数的控制能保证荧光信号具有最大的信噪比，提高检测限度。

在步骤B中，所述载气的流量控制在300～500mL/ min。上述参数的控制能保证氩氢火焰的稳定性，提高荧光测试强度。

在步骤B中，所述还原剂的流速控制在2.0～2.5mL/ min。上述参数的控制能提高氢化物发生效率，提高测试稳定性。

在步骤B中，所述载流液的流速控制在3.0～5.0mL/ min。上述参数的控制能提高氢化物发生效率，提高测试稳定性。