[发明专利]一种确定绿芦笋木质化程度及木质素单体的显色方法

权利要求书

1.一种确定绿芦笋木质化程度及木质素单体的显色方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）切片制作：去除待测绿芦笋的笋尖、根部，于剩下的嫩茎部分取三份0.5cm厚样品分别为样品一、样品二与样品三，随即将三份样品放入用磷酸缓冲溶液配制的4%多聚甲醛溶液中进行固定2小时以上，然后用水冲洗，继而转入30%的蔗糖溶液中固定12小时以上，取出三份样品时将四周的外壁去掉，呈矩形状，用纸吸干水分后分别转至莱卡冰冻切片机制得切片一、切片二及切片三，箱体温度为-23℃，冻台温度为-24℃，另设置一个新鲜绿芦笋的对照切片；

（2）将步骤（1）中切片一用0.5%KMnO₄染色5分钟后用蒸馏水漂洗2分钟，于12%HCl中浸泡1分钟后用蒸馏水浸泡1分钟，用29%氨水封片，可见光观察；

（3）将步骤（1）中切片二置于载玻片上，滴加2%间苯三酚数滴，片刻后再滴数滴12%HCl，封片后可见光观察；

（4）将步骤（1）中切片三与对照切片浸入1%的番红水溶液2小时，先后用水和75%的乙醇溶液漂洗，最后用50%甘油封片，可见光观察。

2.根据权利要求1所述的一种确定绿芦笋木质化程度及木质素单体的显色方法，其特征在于，所述步骤（1）切片厚度均为10-15μm。

3.根据权利要求1所述的一种确定绿芦笋木质化程度及木质素单体的显色方法，其特征在于，所述步骤（1）样品使用莱卡冰冻切片机切片时均使用OCT包埋剂包埋。

4.根据权利要求1所述的一种确定绿芦笋木质化程度及木质素单体的显色方法，其特征在于，所述切片均放置于防脱载玻片上。

5.根据权利要求1所述的一种确定绿芦笋木质化程度及木质素单体的显色方法，其特征在于，所述步骤（1）中样品放入用磷酸缓冲溶液配制的4%多聚甲醛溶液中固定2-4小时，并在30%的蔗糖溶液中固定12-15小时。

6.根据权利要求1所述的一种确定绿芦笋木质化程度及木质素单体的显色方法，其特征在于，所述步骤（3）中间苯三酚由95%酒精配制，且间苯三酚的滴加量为2-4滴，12%HCl的滴加量为3-6滴。