[发明专利]一种抗原多肽及由其构建抗GBM肾炎模型的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种致病新抗原多肽及其用途，尤其涉及Goodpasture病的一种致病 性抗原多肽P14及其在构建抗GBM肾炎模型的应用。

背景技术

抗肾小球基底膜(glomerularbasementdisease，GBM)病，是自身免疫功能紊乱 的一组疾病。该病的特点是循环产生抗GBM抗体，在肺脏和/或肾脏沉积。累及肾脏形成新月 体肾炎，一方面表现为肾小球囊壁层上皮细胞显著增生，堆积成层，在毛细血管丛周围形成 的新月形小体，新月形小体主要由增生的壁层上皮细胞和渗出的单核细胞构成，还可有中 性粒细胞和淋巴细胞浸润，以上成分附着于球囊壁层，在毛细血管球外侧呈新月状或环状 结构分布；另一方面累及肺脏表现为弥漫性肺泡出血，肺和肾同时受累，称为Goodpasture 病。该病进展迅速，预后极差。抗GBM抗体识别的靶抗原是基底膜IV型胶原α3链的非胶原区 1，简称为α3(IV)NC1，即Goodpasture抗原。该抗原由234个氨基酸组成，是具有复杂空间结 构的蛋白质分子，其中精确的诱导疾病发生的线性抗原决定簇并不明确。

既往学者发现，Goodpasture抗原上的线性肽段可以诱发实验动物产生抗GBM肾炎 模型。ChenL等人发现大鼠α3NC1上第14-26位的氨基酸序列SQTTANPSCPEGT，ReynoldsJ等 人发现大鼠α3NC1上第10-23位的氨基酸序列FTRHSQTTANPSCP，均可以诱发WKY大鼠出现新 月体肾炎。RobertsonJ等人发现小鼠α3NC1上位于第14-26位的氨基酸序列SQTTANPSCPEGT 可以诱发WKY大鼠出现新月体肾炎。OoiJD等人在转基因小鼠上，发现小鼠α3NC1上位于第 132-151位的氨基酸序列CPQDWVSLWKGFSFIMFTSA具有致肾炎作用。这些研究为寻找抗GBM病 的起始的致病性线性抗原表位提供了重要证据。但是这些序列均来自动物，并不能真正反 映人类抗GBM病患者α3NC1上的致病性抗原表位。LuoAM等人曾尝试用人类α3NC1上位于第 78-93位的氨基酸序列RNDYDYWLSIPALMP和位于第153-168位的氨基酸序列 SEGTGQALASPGSCLE免疫WKY大鼠，仅有部分大鼠发生轻度的肾小球肾炎，不能产生典型的新 月体肾炎，因此并非Goodpasture抗原上理想的的致病性抗原表位。

各种已报道的Goodpasture抗原的线性抗原多肽列举如下：

截至目前，国际上尚没有利用人类Goodpasture抗原上的线性肽段诱导实验动物 发生抗GBM肾炎的成功方案。

发明内容

为了解决现有技术中已有的人源抗原序列只能引起大鼠轻度的肾小球肾炎而不 能诱导典型的Goodpasture病的症状，并且国内外也缺乏人源抗原的高度模拟人类抗GBM肾 炎的动物模型等问题，本发明提供一种基于Goodpasture病的致病性抗原多肽及其在构建 抗GBM肾炎模型的应用。

为实现本发明的目的，本发明一方面提供一种抗原多肽P14，具有Goodpasture病 的致病性，其致病活性位点氨基酸包括人类基底膜IV型胶原α3链的非胶原区1的第136位色 氨酸W、第137位异亮氨酸I、第139位亮氨酸L和第140位色氨酸W。

其中，所述抗原多肽P14的氨基酸序列为TDIPPCPHGWISLWKGFSFIMF，包括如上所述 的位于人类基底膜IV型胶原α3链的非胶原区1的致病活性位点氨基酸。特别是，P14所示的 抗原多肽来源于人类基底膜IV型胶原α3链的非胶原区1(α3(IV)NC1)的氨基酸序列。

特别是，P14所示的抗原多肽可以诱发实验动物产生与人类抗GBM病表现一致的新 月体性肾小球肾炎。

为实现本发明的目的，本发明另一方面提供Goodpasture病的一种抗原多肽在构 建抗GBM肾炎模型的用途。

为实现本发明的目的，本发明再一方面提供一种抗GBM肾炎模型从而研究 Goodpasture病的发病机制。

为实现本发明的目的，本发明再一方面提供一种抗GBM肾炎模型的构建方法，其特 征在于，包括：

1)将合成并纯化后的Goodpasture病的抗原多肽与完全弗氏佐剂等体积混合，使 其充分乳化，制得该抗原多肽的免疫原；