[发明专利]一种便捷式降钙素原检测试剂盒

权利要求书

1.一种便捷式降钙素原检测试剂盒，其特征在于：包括试纸条、用于固定试纸条的上卡槽和下卡槽、射频识别芯片；所述的试纸条包括塑料胶板和塑料胶板上依次设置的样品垫、荧光示踪物标记的降钙素原第一抗体承载垫、纤维素膜和吸水垫；所述的第一抗体承载垫和吸水垫分别搭接于纤维素膜的两端；所述样品垫的一端搭接于第一抗体承载垫上；所述样品垫为经过抗人红细胞抗体溶液处理、具有吸附红细胞作用的样品垫；所述纤维素膜上具有固定降钙素原第二抗体的检测带T和固定羊抗鼠抗体的质控带C；所述的试纸条置于上卡槽和下卡槽相互拼合构成的腔体内；所述的上卡槽上对应于样品垫的位置设置有用于添加用样品稀释液稀释后的目标分析物校准品或待测样本的加样孔，对应于纤维素膜位置设置有检测窗口；所述样品稀释液为含有类风湿因子和嗜异性抗体阻断剂的缓冲液；所述的下卡槽靠近左端设置有射频识别芯片。

2.根据权利要求1所述的便捷式降钙素原检测试剂盒，其特征在于：所述的阻断剂为鼠热处理IgG或商业化阻断剂复合物。

3.根据权利要求1所述的便捷式降钙素原检测试剂盒，其特征在于：所述降钙素原第一抗体为能特异性结合降钙素原第一表位的鼠单克隆抗体。

4.根据权利要求1所述的便捷式降钙素原检测试剂盒，其特征在于：所述降钙素原第二抗体为能特异性结合降钙素原第二表位的鼠单克隆抗体。

5.根据权利要求1所述的便捷式降钙素原检测试剂盒，其特征在于：所述荧光示踪物为能在一定波长激发光源的激发下产生荧光的带有功能团的有机纳米微球。

6.根据权利要求1所述的便捷式降钙素原检测试剂盒，其特征在于：所述样本垫为滤纸、玻璃纤维、聚酯纤维、无纺布中的一种；所述纤维素膜为硝酸纤维素膜；所述荧光示踪物标记的降钙素原第一抗体承载垫为滤纸、玻璃纤维、聚酯纤维、无纺布中的一种；所述吸水垫为滤纸。

7.一种便捷式降钙素原检测试剂盒的制备方法，其特征在于：制备步骤包括：

1)荧光示踪物标记的降钙素原第一抗体的制备

用10mmol/LpH＝6.5磷酸盐缓冲液将羧基荧光微球稀释到浓度为5mg/ml，配制成微球悬液，每10ml上述微球悬液中加入EDAC1～10mg，溶解混匀，室温静置1小时，10000rpm离心20min，去上清液，然后将沉淀悬浮于等体积的10mmol/LpH＝7.2的磷酸盐缓冲液中，超声分散；然后向羧基微球悬液中加入降钙素原第一表位单克隆抗体，每10ml上述微球悬液中加入抗体1～5mg，混合，室温反应2小时，再向上述微球悬液中加入牛血清白蛋白，使得微球悬液中牛血清白蛋白的浓度为2～20mg/ml，混匀，室温反应1小时；10000rpm离心20min，去上清，沉淀悬浮于等体积的10mmol/LpH＝7.2的磷酸盐缓冲液中，超声分散，4℃保存备用；

2)荧光示踪物标记的降钙素原第一抗体承载垫的制备

用步骤(1)制备的荧光抗体喷涂稀释液稀释荧光抗体到0.5～2mg/ml，在三维喷点平台上将荧光抗体涂于玻璃纤维垫上，37℃干燥1小时，备用；

3)纤维素膜包被抗体的制备

将硝酸纤维素膜黏贴在PVC塑料胶板中间位置，用抗体包被稀释液分别稀释降钙素原第二表位单克隆抗体和羊抗鼠抗体到浓度为0.5～2.0mg/ml制备成喷膜液，其中，在三维喷点平台上喷膜液以条带状喷点在硝酸纤维素膜上适当位置(分别形成固定降钙素原第二抗体的检测带T和固定羊抗鼠抗体的质控带C)，37℃干燥1小时，备用。

4)样品垫的预处理

将裁剪好的样品垫置于抗人红细胞抗体溶液中浸泡5分钟，捞出后沥干，置于37℃干燥过夜，备用；

5)荧光定量检测板的组装

将干燥后的第一抗体承载垫、样品垫、吸水垫在斩切机上分切成适当尺寸的长条状，按样品垫、第一抗体承载垫、纤维素膜、吸水垫顺序粘帖到塑料胶板上，首尾相互连接，制作成半成品大板，然后用切条机将半成品大板切成4mm宽的试纸条，装上、下卡槽和射频识别芯片；

6)校准曲线的建立和射频识别芯片的写入

配置样品稀释液：pH7.6的磷酸盐100mmol/L、BSA10g/L、tween205g/L、热处理鼠IgG1g/L；取系列浓度的目标分析物校准品各100ul，用样品稀释液3倍,然后滴加到检测板样品加样孔中，计时检测，计时时间结束后立即在荧光检测仪上检测，读取荧光信号T和C的荧光信号强度；以校准品浓度为纵坐标，以T荧光信号和C荧光信号比值为横坐标，进行非线性回归，可得到校准曲线方程；通过射频识别芯片读写软件将校准曲线方程、批号、项目名称、有效期、参考范围、质控线荧光信号有效值、加密密码等信息写入荧光定量检测板中的射频识别芯片内。