[发明专利]一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法及引物

说明书

本发明公开了一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法及引物。其操作简单：只需PCR反应之前加荧光饱和染料即可；检测速度快且高通量：全部操作过程只需2小时，极大缩短了分型所需时间；费用低，不需要特异性荧光标记探针；准确性高、特异性好，重复性好，可以准确、快速、高通量地进行分析，有利于在临床实践中推广应用。

技术领域

本发明属于病毒检测领域，具体涉及一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法及引物。

背景技术

小鼠细小病毒属于细小病毒属的单股负链DNA病毒，在普通级小鼠中感染率较高。MVM株首次发现于1966年，在后续研究中发现该病毒株在生物体内有抑制肿瘤的作用；起初被认为是孤立的细小病毒株的MPV株最早是在1933年从L3杀伤性T淋巴细胞中分离出来的。MVM株和MPV株和其他的细小病毒一样具有强的物理稳定性，对酸碱、温度等有一定的耐受能力。在生物制品的生产中，许多生物制品所用的细胞系来源于鼠源细胞如中国仓鼠卵巢细胞（CHO）、乳仓鼠肾细胞等，而这些细胞容易受细小毒株污染。自然感染细小病毒的鼠群通常是无症状的，但研究表明幼鼠及免疫不全的鼠感染MVM株出现矮小症，突发死亡及造血功能障碍等。相比MVM株感染，研究报道实验室和自然感染MPV株的小鼠均无病理状态。由于临床感染的症状弱或无症状以及细小病毒强的生存力，使其成为目前动物屏障设施中一种很难根除的病原。

体外检测小鼠细小病毒株的方法有多种，如ELISA、感染实验、血凝实验，免疫荧光法、PCR方法等。鉴于感染后一些未能发生血清转换的小鼠则无法通过血清抗体检测，因而快速、灵敏的PCR检测方法被常用于细小病毒的日常检测。细小病毒的组织嗜性广泛，在小鼠肝、肾、脾、盲肠内容物、粪便中等均能检测病毒。目前已有的PCR检测方法有单独检测MVM株或MPV株，检测两种毒株但不区分是哪种毒株，所以迫切需要一种既可检测两种小鼠细小毒株又能够鉴别是MVM株还是MPV株的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法及引物。

本发明所采取的技术方案是：

一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法的引物，其核苷酸序列如下所示：

P1: GACCTYACWGCTTSCATGAT（SEQ ID NO：1）；

P2: GTGWGGYTGACAAAATCCWACTT（SEQ ID NO：2）。

一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测试剂盒，该试剂盒含有上述的引物。

一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的的HRM检测方法，包括以下步骤：

1)从样品中提取病毒核酸；

2)以核酸为模板，利用上述引物对P1和P2以及荧光饱和染料，进行扩增反应获得扩增产物；

3)对扩增产物进行HRM分析，确定病毒类型。

优选的，步骤2）中扩增反应体系如下：

Premix Ex-Taq 10µL

引物P1 0.5µL

引物P2 0.5µL

LC green 染料 1µL

模板 1µL

ddH₂O 7µL

总体积 20µL。