[发明专利]一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法及引物

权利要求书

1.一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测方法的引物，其核苷酸序列如下所示：

P1:GACCTYACWGCTTSCATGAT；

P2:GTGWGGYTGACAAAATCCWACTT。

2.一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的HRM检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有权利要求1所述的引物。

3.一种快速鉴别小鼠细小病毒MVM株与MPV株的的HRM检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)从样品中提取病毒核酸；

2)以核酸为模板，利用权利要求1所述的引物对P1和P2以及荧光饱和染料，进行扩增反应获得扩增产物；

3)对扩增产物进行HRM分析，确定病毒类型；

上述方法用于非疾病的诊断和治疗。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中扩增反应体系如下：

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤2)中扩增反应程序如下：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸35s；循环35次；72℃终延伸5min。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤3)中HRM分析仪器熔解温度设定是以每步升温0.3℃的速率从80℃到90℃进行荧光信号的收集。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤3)中HRM分析的具体分析过程：在80-90℃熔解温度范围内，若待检测样品熔解曲线有两个熔解区间即峰型曲线有两个熔解峰时，判定该样品为小鼠细小病毒MVM株；只有一个熔解峰的判定为小鼠细小病毒MPV株。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤3)中HRM分析的具体分析过程：在99％的置信区间内，当检测样品含有2个熔解峰时，若2个熔解峰的Tm值分别为84.63±0.42℃、86.76±0.36℃，且二者差值的绝对值为2.13±0.08℃，则判定该样品为小鼠细小病毒MVM型毒株；当检测样品只有1个熔解峰，熔解Tm值为85.4±0.36℃时，则判定为小鼠细小病毒MPV型毒株。