[发明专利]一种IdeS蛋白酶、其制备方法及应用

说明书

本发明属于生物酶技术领域，具体涉及一种IdeS蛋白酶、其制备方法及应用，所述IdeS蛋白酶的氨基酸序列包含如SEQ ID NO.1所示的片段。本发明制备的IdeS蛋白酶可在大肠杆菌和/或毕赤酵母中可溶性高效表达，表达量高，仍具有IdeS蛋白酶的特异性酶活，可以特异性的酶切IgG抗体获得所要的抗体片段，且能进行固定化，以利于后期的工业化应用；且IdeS蛋白酶可通过工业化进行大规模生产，使得IdeS蛋白酶的大量生产成为可能，为IdeS的应用奠定了基础。

技术领域

本发明属于生物酶技术领域，具体涉及一种IdeS蛋白酶、其制备方法及应用。

背景技术

免疫球蛋白G降解酶IdeS(immunoglubulin G-degrading enzyme ofStreptococcus pyogenes,IdeS)是由人类致病菌酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)产生并分泌至胞外的一种半胱氨酸水解酶。该蛋白酶具有极高的底物特异性，仅识别IgG，在抗体下铰链区的特定位点进行酶切，使IgG水解为完整的F(ab’)2片段和Fc片段。除了人源IgG，IdeS还可以切割多种动物来源的IgG，如小鼠、家兔、恒河猴、羊以及人动物嵌合IgG等。IdeS具有独特的酶活特异性，可以作为工具酶应用于IgG的Fab’和F(ab’)2亚单位制备、抗体药物或者抗体融合蛋白药物的结构表征分析。

到目前的研究发现，IdeS作用底物只有IgG类抗体，而且与胃蛋白酶和木瓜蛋白酶不同，IdeS切割位点专一性高，产物均一，酶切IgG后可以获得完整的F(ab’)2片段和Fc片段，其中，与抗原结合的F(ab’)2片段分子量大小约为100kDa，Fc片段的分子量大小为25kDa。随着抗体药物的发展及表征鉴定的常态化，蛋白酶IdeS的用量越来越大，原有的宿主菌提取纯化已经不能满足该酶的需求。

许静等人发表的“半胱氨酸蛋白酶IdeS的原核表达、纯化及活性鉴定”，中国生物工程杂志，2014,34(10)：8-14，利用原核表达载体Pgex-4T-2构建了一种新的双标签表达系统，对IdeS进行了高效重组表达。但是该酶的重组表达亦具有一定的局限，其表达量不高，较难大规模应用。

发明内容

本发明为了克服上述缺陷，本发明提供了一种IdeS蛋白酶、其制备方法及应用，该IdeS蛋白酶能够在大肠杆菌和/或毕赤酵母中可溶性高效表达，表达量高，仍具有IdeS蛋白酶的特性。

为达到此发明的目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种IdeS蛋白酶，所述IdeS蛋白酶的氨基酸序列包含如SEQ ID NO.1所示的片段，所述片段的序列如下：

DSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFNGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGDQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKKELTEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTNHHHHHHSSG。