[发明专利]人iPS细胞向睾丸间质细胞的诱导分化方法及其用途有效
| 申请号： | 201510845021.8 | 申请日： | 2015-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN105255826B | 公开（公告）日： | 2019-01-08 |
| 发明（设计）人： | 项鹏;姜美花;李伟强 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077;A61K35/52;A61P5/26 |
| 代理公司： | 北京中政联科专利代理事务所(普通合伙) 11489 | 代理人： | 刘玉玲 |
| 地址： | 510275 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 诱导 多功能 干细胞 睾丸 间质 细胞 分化 方法 及其 用途 | ||
1.一种人诱导多能干细胞(iPS)向睾丸间质细胞(iPS-hNCSCs-LCs)的 诱导分化方法，其特征在于：
(1)使人诱导多能干细胞(iPS)诱导分化为人神经嵴干细胞 (iPS-hNCSCs)；
(2)使步骤(1)中获得的人神经嵴干细胞(iPS-hNCSCs)诱导分化为睾丸间质细胞(iPS-hNCSCs-LCs)，具体为扩增步骤(1)获得的 人神经嵴干细胞（iPS-hNCSCs），随后更换为睾丸间质细胞(LCs)分化培养液诱导分化，获得睾丸间质细胞(iPS-hNCSCs-LCs)；其中睾丸间质细胞（LCs）分化培养液为在DMEM-F12培养基中加入2％FCS、10ng/mL的PDGF-BB、1ng/ml的LH、1nM甲状腺激素T3 和70ng/mlIGF-I。
2.根据权利要求1的方法，其中步骤(1)包括将人诱导多能干细胞(iPS) 消化后重悬，将悬浮细胞接种在低粘附性的培养皿中， 使用神经分化培养液进行悬浮培养，形成胚体，随后将胚体接种到用纤连 蛋白包被的培养板中，用神经嵴干细胞培养液进行贴壁培养，将贴壁培养 的细胞通过流式细胞仪分选出P75+/HNK1+双阳细胞，即为人神经嵴干细胞(iPS-hNCSCs)。
3.根据权利要求2的方法，其中所述神经分化培养液含有80％ KnockoutTMDMEM、18％KnockoutTMSR、1％(V/V)青链霉素混合液、1mM L-谷氨酸、0.1mM的β-巯基乙醇。
4.根据权利要求2的方法，其中所述神经嵴干细胞培养液为按1:1比例将DMEM-F12培养基与Neurobasal培养基混合，并添加1％(V/V)N2、 2％(V/V)B27、1％(V/V)青链霉素混合液、1mML-谷氨酸，0.1mM的β- 巯基乙醇，再加入10ng/mL的bFGF和10ng/mL的EGF。
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