[发明专利]一种含重组乙肝表面抗原的纳米颗粒疫苗制剂及其制备方法

说明书

一种含重组乙肝表面抗原的纳米颗粒疫苗制剂，其组成为：以人血清白蛋白、重组乙肝表面抗原和碳酸氢钠组成内核，由聚乳酸‑聚羟基乙酸嵌段共聚物为包封层将内核包裹，最外层包覆有壳聚糖或甘露聚糖或它们的混合物。制备方法包括：(1）将重组乙肝表面抗原、人血清白蛋白和碳酸氢钠加入到含有聚乙烯醇的磷酸盐缓冲溶液中,得到内水相；（2）将聚乳酸‑聚羟基乙酸嵌段共聚物溶于有机溶剂中制成油相，取步骤（1）所得内水相加入油相中,高速搅拌形成W/O初乳液；（3）将W/O初乳液加入含有聚乙烯醇的外水相溶液中，高速搅拌形成W/O/W复乳液，再低速搅拌，离心洗涤，收集纳米颗粒，真空冷冻干燥，得到含重组乙肝表面抗原的纳米颗粒疫苗制剂成品。

技术领域

本发明涉及一种生物制剂，特别是一种可鼻腔免疫的、具有pH值敏感性和抗原递呈细胞靶向性的、包裹乙肝表面抗原的聚乳酸-聚羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA)纳米颗粒疫苗制剂，属于生命科学技术领域。

背景技术

乙型肝炎是一种严重威胁人类健康的世界性传染疾病，它是由乙型肝炎病毒（HBV）的感染而引起的疾病。目前，接种乙肝疫苗是预防和控制HBV传播的最有效的措施之一。最常使用的乙肝疫苗是由基因重组技术获得的乙肝表面抗原（HBsAg）经纯化、灭活及加入铝佐剂吸附而成的铝佐剂乙肝疫苗。为了达到持久而有效的免疫应答效果，铝佐剂乙肝疫苗需在0，1，2个月或0，1，6个月进行三次注射的免疫程序。由于需要专业人员进行注射免疫接种，且免疫程序复杂，导致相当一部分人难以完成免疫程序，这种现象在不发达地区尤为严重。此外，铝佐剂乙肝疫苗仅选择性诱导机体产生体液免疫应答，而不能有效诱导产生细胞免疫应答，不能有效清除细胞内存在的HBV病毒；也不能产生粘膜免疫、产生粘膜抗体，防止病毒通过粘膜进行入侵。因而，临床需要研发免疫方法简便的、免疫效果更强的新型乙肝疫苗，使更广泛的人群受到有效的保护。与注射接种相比，鼻腔粘膜免疫接种方法简便，不需要侵入接种，可避免专业人员参与，自己即可进行接种；同时，也可避免注射时针刺导致的疼痛和损伤，患者依从性好，尤其对于儿童。此外，鼻腔粘膜免疫接种可减少使用污染针头导致的意外风险，增加疫苗接种的安全性，降低接种费用，适合大范围人群免疫接种。

发明内容

本发明的目的是提供一种含重组乙肝表面抗原的纳米颗粒疫苗制剂，克服了铝佐剂乙肝疫苗需要注射带来的诸多问题及其不能诱导粘膜免疫和细胞免疫的缺点。

本发明的另一目的是提供一种含重组乙肝表面抗原的纳米颗粒疫苗制剂的制备方法。

具体的，本发明的一种含重组乙肝表面抗原的纳米颗粒疫苗制剂的组成是这样的，以稳定性保护剂人血清白蛋白、重组乙肝表面抗原和释放促进剂碳酸氢钠组成内核，由高分子材料聚乳酸-聚羟基乙酸嵌段共聚物作为包封层将内核包裹，最外层包覆有壳聚糖或甘露聚糖或它们的混合物。

本发明中，重组乙肝表面抗原为酵母乙型肝炎表面抗原或中国仓鼠卵巢细胞分泌的乙型肝炎表面抗原。

本发明中，聚乳酸-聚羟基乙酸嵌段共聚物分子量为9.0×10³～8.7×10⁴，其中聚乳酸与聚羟基乙酸（PLA:PLG）的质量比为（50:50）～（85:15）。

本发明中，壳聚糖为低分子量壳聚糖，分子量低于5000 Da。

本发明中，甘露聚糖为从酿酒酵母提取的细胞壁多糖，分子量35000–60000 Da。

本发明的含重组乙肝表面抗原的纳米颗粒疫苗制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1）将重组乙肝表面抗原、人血清白蛋白和碳酸氢钠加入到含有聚乙烯醇的磷酸盐缓冲溶液中,混合得到内水相；

（2）将聚乳酸-聚羟基乙酸嵌段共聚物溶于有机溶剂中制成油相，取步骤（1）所得内水相加入油相中,高速搅拌形成W/O初乳液；