[发明专利]展现剂量响应的性别分选的精子以及生产展现剂量响应的性别分选的精子的方法有效
| 申请号: | 201510827567.0 | 申请日: | 2015-09-25 |
| 公开(公告)号: | CN105462918B | 公开(公告)日: | 2020-04-24 |
| 发明(设计)人: | R·维什瓦纳特;K·M·埃文斯;T·B·吉利根;J·莫雷诺;R·楞次;C·冈萨雷斯-马琳 | 申请(专利权)人: | 英格朗公司 |
| 主分类号: | C12N5/076 | 分类号: | C12N5/076 |
| 代理公司: | 北京三友知识产权代理有限公司 11127 | 代理人: | 庞东成;李栋修 |
| 地址: | 美国德*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 展现 剂量 响应 性别 分选 精子 以及 生产 方法 | ||
1.一种生产具有改善的剂量响应的性别分选的精子的方法,所述方法包括:
a)用缓冲保持介质稀释牛精子样品,精子样品与缓冲保持介质之比为1:1至1:10;
b)通过将经稀释的精子样品离心,除去上清液和重悬浮直到达到目标浓度而调节经稀释的精子样品的浓度至目标浓度范围,其中所述目标浓度模拟天然存在的精子浓度;
c)用DNA选择性染料染色所述精子样品;
d)用流式细胞仪将经染色的精子样品性别分选到捕获液中;
e)将步骤a)~c)的精子样品的pH值维持在目标pH值范围;以及
f)向所述缓冲保持介质、所述DNA选择性染料和所述捕获液的至少一种中补充至少一种抗氧化剂,其中通过步骤a)~f)分选的至少300万性别分选的精子的剂量在300万细胞至400万细胞的剂量下展现改善的剂量响应。
2.如权利要求1所述的方法,其中用缓冲保持介质稀释精子样品和调节经稀释的精子样品的浓度至目标浓度范围的步骤进一步包括:a)在7.0~7.4的目标pH下在所述缓冲保持介质中稀释精子样品;和b)将经稀释的精子样品浓缩至800×106个精子/ml~2100×106个精子/ml的目标浓度。
3.如权利要求1或2所述的方法,其中通过步骤a)~e)分选的至少400万性别分选的精子的剂量具有与1500万常规未经分性精子至少相同的受精力。
4.一种通过权利要求1-3中任一项的方法生产的性别分选的授精配剂,所述授精配剂在大于300万的剂量下具有剂量响应。
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