[发明专利]测定食用油的甘油中稳定氧同位素比值的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及测定食用油的甘油中稳定氧同位素比值(记作δ¹⁸O)的方法。具体而言， 样品通过酯交换反应使食用油中的甘油游离出来，液液萃取除去脂肪酸甲酯，利用气相色 谱-裂解-稳定同位素比值质谱仪(GC-P-IRMS)测定甘油的δ¹⁸O，属于稳定同位素分析技术领 域。

背景技术：

食用油是人们日常生活中必不可少的食物，但食用油因种类、来源不同而存在较 大的营养价值和市场价格差异。我国是世界上最大的食用油生产国和消费国，食用油的消 费量逐年攀升，随着生活水平的提高，富含不饱和脂肪酸的植物油，尤其是高档植物油越来 越受到消费者青睐。然而由于我国食用油行业准入制度不完善，生产标准低，市场上食用油 质量良莠不齐，更有甚者，有些不法企业弄虚作假，以廉价食用油冒充高档植物油的现象屡 见不鲜，以动物油脂、潲水油冒充纯种植物油的情况更是当前油品监管的难题。

稳定同位素技术在食品种类、来源辨别及掺伪鉴别方面具有重要应用，国外从上 世纪开始研究不同来源油脂的稳定同位素特征。作为油脂中的主要成分，甘油的稳定碳氧 同位素特征因油脂属性(动物脂肪、植物油)和种类(橄榄油、菜籽油、亚麻油等)的不同而存 在差异，该特征已成功的被用作高档橄榄油的真实性鉴别依据。然而，食用油中甘油δ¹⁸O的 测定是稳定同位素分析领域的技术难题，这是因为其在食用油中是以甘油三酯的形式存 在，测定时需提取甘油，排除其他含氧组分的干扰后方可进行稳定同位素分析：Weber等人 (13C-paternofNaturalGlycerol:OriginandPracticalImportance)报道了利用高 浓度氢氧化钠溶液水解油脂，酸化处理并用乙醚/石油醚混合液除去脂肪酸后用乙醇溶解 甘油，然后通过减压蒸馏提取甘油并用高效蒸馏器纯化甘油的方法；Camin等人 (Applicationofmultielementstableisotoperatioanalysistothe characterizationofFrench,italian,andspanishcheeses和Correlationbetween multielementstableisotoperatioandgeographicalorigininPeretacows'milk cheese)沿用Weber的方法处理了奶酪中的甘油，将甘油五氧化二磷干燥器中进行充分干燥 然后用高温裂解元素分析仪-稳定同位素比值质谱仪(TC/EA-IRMS，含手动进样过程，对操 作人员的技能要求高)测定甘油的δ¹⁸O；Fronza等人(δ¹³Candδ¹⁸O-valuesofglycerolof foodfats)选择甲醇溶解油脂样品，在甲醇钠存在的条件下进行酯交换，减压蒸馏除去大 部分甲醇后将剩余物溶于正己烷和水的混合液中，酸化水相并除去脂肪酸，通过乙醇提取 甘油并用减压蒸馏对之纯化，结合CHN-EA-IRMS测定了甘油δ¹⁸O。由上述介绍可知，已有的这 些测定油脂中甘油δ¹⁸O的方法，前处理过程复杂，分析时对样品纯度要求苛刻，对操作人员 的技能要求高。为克服上述方法的弊端，Jung等人(Reductiveestercleavageofacyl glycerides–GC-C/P-IRMSmeasurementsofglycerolandfatyalcohols)选择了结合 酯裂解和气相色谱-燃烧/裂解-稳定同位素比值质谱仪(GC-C/P-IRMS)测定甘油δ¹⁸O的方 法：样品溶解在叔丁基甲醚中，加入氢化铝锂(LiAlH₄)后70℃保温1h，冷却后再加入LiAlH₄， 再70℃保温1h，冰浴冷却后用碳酸钾除去过量的LiAlH₄，并加入乙醇/乙醚混合溶液，剧烈 振荡后取出水相并再加入乙醇，酸化该溶液并除去Al(OH)₃，然后加入玻璃粉并用乙醇洗涤 沉淀物最后才取样测定。可以看出，这个方法的前处理过程极尽繁琐，并且氢化铝锂是危险 品(遇水易爆炸)，使用和保存过程中存在一定的安全风险。