[发明专利]从含酶切位点的融合蛋白中纯化蛋白的方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201510823449.2 | 申请日： | 2015-11-24 |
| 公开（公告）号： | CN105483193B | 公开（公告）日： | 2019-03-29 |
| 发明（设计）人： | 李浩冬;顾湘英;郭鸿 | 申请（专利权）人： | 上海联合赛尔生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/16 |
| 代理公司： | 北京德琦知识产权代理有限公司 11018 | 代理人： | 孔丽君;王珍仙 |
| 地址： | 201206 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 含酶切位点 融合 蛋白 纯化 方法 试剂盒 | ||
1.一种从含有酶切位点的融合蛋白中纯化蛋白的方法，包括如下步骤：
将能够对所述酶切位点特异性酶切的酶固定在第一层析柱内的介质上；
将固定有酶的第一层析柱与第二层析柱串联，所述第二层析柱能够吸附所述融合蛋白酶切后的非目的蛋白部分，并且不会吸附目的蛋白；
将含有所述融合蛋白的样品依次流经第一层析柱和第二层析柱，其中所述目的蛋白为PTH，所述酶为凝血酶，
其中，所述融合蛋白为硫氧还蛋白-PTH融合蛋白，所述第一层析柱内的介质采用高交联的琼脂糖，所述目的蛋白的等电点大于9.0，所述融合蛋白和非目的蛋白的等电点低于7.5，所述第二层析柱采用阴离子交换介质。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述酶的固定在4±2℃，pH8-8.5条件下进行12-20小时。
3.一种利用如权利要求1所述的方法纯化蛋白的试剂盒，包括第一层析柱和第二层析柱，其中第一层析柱中的介质固定有能够从融合蛋白酶切得到目的蛋白的酶，第二层析柱中的介质能够吸附所述融合蛋白被酶切后的非目的蛋白部分，并且不会吸附所述目的蛋白，所述试剂盒在使用时依次串联连接第一层析柱和第二层析柱，其中，所述融合蛋白为硫氧还蛋白-PTH融合蛋白，所述酶为凝血酶，其中所述目的蛋白为PTH，所述第一层析柱内的介质采用高交联的琼脂糖，所述目的蛋白的等电点大于9.0，所述融合蛋白和非目的蛋白的等电点低于7.5，所述第二层析柱采用阴离子交换介质。
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