[发明专利]一种人NOTCH1 NICD蛋白Ser2162位点磷酸化抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种人NOTCH1 NICD蛋白Ser2162位点磷酸化抗体及其制备方法。该制备方法包括以下步骤：(1)合成包含如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的抗原合成肽；(2)利用步骤(1)合成的抗原合成肽免疫动物并收集抗血清；(3)将步骤(2)收集的抗血清进行纯化和鉴定，得到人NOTCH1 NICD蛋白Ser2162位点磷酸化抗体。本发明的人NOTCH1 NICD蛋白Ser2162位点磷酸化抗体可用于检测正常细胞、肿瘤细胞及用药后肿瘤细胞的表达差异，为临床肿瘤疾病的诊断或治疗提供潜在的作用靶点，在疾病诊断、治疗及预后判定等方面具有广泛的临床应用前景。

技术领域

本发明涉及抗体及其制备技术领域，具体涉及一种特异性针对人NOTCH1 NICD蛋白Ser2162位点磷酸化抗体及其制备方法和应用。

背景技术

NOTCH信号是一个在进化过程中高度保守的信号通路，广泛存在于无脊椎动物和脊椎动物的多个物种之中，它是介导细胞和细胞之间直接接触的主要信号通路之一，调控了多细胞机体的细胞凋亡、增殖和分化。从果蝇到人类，NOTCH信号途径的遗传特征高度保守，而在哺乳动物中其过程尤为复杂。

NOTCH受体、NOTCH配体和细胞内效应分子CSL共同组成NOTCH信号通路。NOTCH受体为单链跨膜蛋白，其分子由胞外区(ECN)、跨膜区和胞内区(NICD)组成，具有高度保守性(参见图1)。目前哺乳动物中发现4种NOTCH基因(NOTCH1，NOTCH 2，NOTCH 3，NOTCH 4)，各亚型的主要差异在EGF样重复的数目和胞内区的长度。NOTCH配体亦为细胞表面表达的单链跨膜蛋白，已发现人的NOTCH配体有Jagged 1，Jagged 2，Delta 1，Delta 3，Delta 4。

NOTCH信号蛋白受体与配体相互作用导致NOTCH蛋白连续裂解，释放出胞内段蛋白(NICD)，NOTCH1 NICD转入细胞核内，通过与CBF1/Su(H)/LAG1(CSL)相互作用形成复合物，使后者由转录抑制因子转化为转录激活因子。NICD-CBF1/Su(H)/LAG1(CSL)复合物直接诱导转录的靶基因是HES1，HES1是碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix，bHLH)类转录因子，它又调节其它与细胞分化直接相关基因的转录。在细胞分化中，NOTCH信号的功能有以下几个方面：①参与胚胎发育；②参与T细胞发育；③维持造血干细胞的自我更新；④调节血管生成。

NOTCH1信号途径参与细胞的分化、增值和凋亡，并影响许多器官的发育和功能，其病理生理改变与肿瘤、血液系统、心血管系统、干细胞等多种疾病相关。研究表明：在肿瘤的发生和发展过程中，NOTCH1信号通路发挥着不同的作用；在大多数恶性肿瘤中，NOTCH1信号主要为促癌作用，活化的NOTCH1蛋白可使细胞恶性转化发展为肿瘤，如在宫颈癌、头颈肿瘤、肾癌及多种血液系统肿瘤中均发现NOTCH1的异常表达；NOTCH1信号的紊乱会阻止细胞分化，使得未分化细胞向恶性转化；而在B细胞白血病等肿瘤中，NOTCH1则可以抑制细胞生长诱导凋亡。在宫颈癌的早期，NOTCH1信号起促癌作用，晚期则起抑癌作用。这表明NOTCH1在不同肿瘤和肿瘤的不同阶段中，其发挥的作用也不尽相同。此外，由于NOTCH1信号通路可能作为多条通路的重要交汇点，NOTCH1信号的异常不仅对肿瘤的发生有直接的作用，而且能通过对其他通路的影响间接地诱导肿瘤的发生。