[发明专利]用于清除人体有害活性氧的化合组合物、制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生命健康医学领域，尤其涉及一种用于清除人体有害活性氧的化合组合物、制备方法及其应用。

背景技术

活性氧(ROS)包括超氧自由基O₂-和过氧化氢H₂O₂的化合物，是生物在线粒体中进行有氧呼吸时产生的一种副产物，其在细胞中的积累会形成氧化胁迫，这将对脂质、蛋白质和核酸等造成损伤，从而毒害细胞，这种长期累积的氧化胁迫是衰老和许多代谢疾病的主要成因。人体内超氧自由基O₂-活性很强，过氧化氢H₂O₂在人体中存在时间较长，两种物质无论哪一种存在，都对人体有很大毒害作用。然而，目前抗氧化的药物，例如添加超氧化物歧化酶(SOD)或SOD激活剂的化妆品，只能清除活性氧ROS中的超氧自由基O₂-或过氧化氢H₂O₂之一种，而无法实现有害物质的彻底清除。由于超氧化物歧化酶SOD是一种蛋白质，无法透过细胞膜，对细胞的保护作用几乎可以忽略。况且SOD会将超氧化物转变为H₂O₂，其在皮肤表面的存留，对皮肤有一定的伤害。因此有必要提出一种化合组合物，能够清除人体活性氧中的超氧自由基O₂-和过氧化氢H₂O₂。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种用于清除人体有害活性氧的化合组合物、制备方法及其应用，旨在解决目前抗氧化的药物不能实现人体活性氧中超氧自由基O₂-和过氧化氢H₂O₂的双清除，而无法彻底清除人体有害活性氧物质的问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种用于清除人体有害活性氧的化合组合物，该化合组合物包括用于清除超氧自由基O₂-的7-羟基香豆素和用于清除过氧化氢H₂O₂的白藜芦醇混合组成，其中，所述7-羟基香豆素和白藜芦醇按照物质的量的比2～3:1混合。

为实现上述目的，本发明还提供了一种用于清除人体有害活性氧的化合组合物的制备方法，该化合组合物的制备方法包括步骤：

配制具有抗氧化功能的包含有酚羟基官能团的化合物，将所述化合物溶解于细胞培养基中得到化合物培养基；

从化合物培养基中筛选得到用于清除超氧自由基O₂-的7-羟基香豆素；

从化合物培养基中筛选得到用于清除过氧化氢H₂O₂的白藜芦醇；

将筛选出来的7-羟基香豆素和白藜芦醇按照预定物质的量的比2～3:1混合成化合组合物。

优选的，所述从化合物培养基中筛选得到用于清除超氧自由基O₂-的7-羟基香豆素的步骤包括：

将Hacat人正常皮肤细胞株接种于48孔的细胞板中培养16小时；

在细胞培养板的每个孔中添加相同体积的化合物培养基并于二氧化碳培养箱中培养一段预定时间，将细胞培养板中的细胞经过胰酶消化，并通过离心处理得到Hacat人正常皮肤细胞；

基于超氧化物特异性指示剂WST-1的显色反应利用分光光度计测定经过所述化合物培养基处理的Hacat人正常皮肤细胞中超氧自由基O₂-的浓度；

从所述化合物培养基中筛选出所述分光光度计测定的颜色变化明显程度最强的7-羟基香豆素。

优选的，所述从化合物培养基中筛选得到用于清除过氧化氢H₂O₂的白藜芦醇的步骤包括：

将Hacat人正常皮肤细胞株接种于48孔的细胞板中培养16小时；

在细胞培养板的每个孔中添加相同体积的化合物培养基并于二氧化碳培养箱中培养一段预定时间，将细胞培养板中的细胞经过胰酶消化，并通过离心处理得到Hacat人正常皮肤细胞；

基于过氧化氢特异指示剂PF1的荧光强度变化利用荧光仪测定经过所述化合物培养基处理的Hacat人正常皮肤细胞中过氧化氢H₂O₂的浓度；

从所述化合物培养基中筛选出所述荧光仪测定的荧光变化明显程度最强的白藜芦醇。

优选的，所述Hacat人正常皮肤细胞株经过磷酸缓冲液PBS清洗。