[发明专利]用于清除人体有害活性氧的化合组合物、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种用于清除人体有害活性氧的化合组合物，其特征在于，该化合组合物由用于清除超氧自由基O₂-的7-羟基香豆素和用于清除过氧化氢H₂O₂的白藜芦醇混合组成，其中，所述7-羟基香豆素和白藜芦醇按照物质的量的比2～3:1混合。

2.一种如权利要求1所述的用于清除人体有害活性氧的化合组合物的制备方法，其特征在于，该制备方法包括步骤：

配制具有抗氧化功能的包含有酚羟基官能团的化合物，将所述化合物溶解于细胞培养基中得到化合物培养基；

从化合物培养基中筛选得到用于清除超氧自由基O₂-的7-羟基香豆素；

从化合物培养基中筛选得到用于清除过氧化氢H₂O₂的白藜芦醇；

将筛选出来的7-羟基香豆素和白藜芦醇按照预定物质的量的比2～3:1混合成化合组合物。

3.如权利要求2所述的用于清除人体有害活性氧的化合组合物的制备方法，其特征在于，所述从化合物培养基中筛选得到用于清除超氧自由基O₂-的7-羟基香豆素的步骤包括：

将Hacat人正常皮肤细胞株接种于48孔的细胞板中培养16小时；

在细胞培养板的每个孔中添加相同体积的化合物培养基并于二氧化碳培养箱中培养一段预定时间，将细胞培养板中的细胞经过胰酶消化，并通过离心处理得到Hacat人正常皮肤细胞；

基于超氧化物特异性指示剂WST-1的显色反应利用分光光度计测定经过所述化合物培养基处理的Hacat人正常皮肤细胞中超氧自由基O₂-的浓度；

从所述化合物培养基中筛选出所述分光光度计测定的颜色变化明显程度最强的7-羟基香豆素。

4.如权利要求2所述的用于清除人体有害活性氧的化合组合物的制备方法，其特征在于，所述从化合物培养基中筛选得到用于清除过氧化氢H₂O₂的白藜芦醇的步骤包括：

将Hacat人正常皮肤细胞株接种于48孔的细胞板中培养16小时；

在细胞培养板的每个孔中添加相同体积的化合物培养基并于二氧化碳培养箱中培养一段预定时间，将细胞培养板中的细胞经过胰酶消化，并通过离心处理得到Hacat人正常皮肤细胞；

基于过氧化氢特异指示剂PF1的荧光强度变化利用荧光仪测定经过所述化合物培养基处理的Hacat人正常皮肤细胞中过氧化氢H₂O₂的浓度；

从所述化合物培养基中筛选出所述荧光仪测定的荧光变化明显程度最强的白藜芦醇。

5.如权利要求3或4所述的用于清除人体有害活性氧的化合组合物的制备方法，其特征在于，所述Hacat人正常皮肤细胞株经过磷酸缓冲液PBS清洗。

6.如权利要求2所述的用于清除人体有害活性氧的化合组合物的制备方法，其特征在于，所述从化合物培养基中筛选得到用于清除超氧自由基O₂-的7-羟基香豆素的步骤包括：

将人皮肤成纤维细胞株HSF接种于48孔的细胞板中培养16小时；

在细胞培养板的每个孔中添加相同体积的化合物培养基并于二氧化碳培养箱中培养一段预定时间，将细胞培养板中的细胞经过胰酶消化，并通过离心处理得到人皮肤成纤维细胞；

基于超氧化物特异性指示剂WST-1的显色反应利用分光光度计测定经过所述化合物培养基处理的人皮肤成纤维细胞中超氧自由基O₂-的浓度；

从所述化合物培养基中筛选出所述分光光度计测定的颜色变化明显程度最强的7-羟基香豆素。