[发明专利]基于微间距阵列电极的免疫定量传感器检测金黄色葡萄球菌的试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于微间距阵列电极的免疫定量传感器检测金黄色葡萄球菌的试剂盒及方法，属于生物技术领域。

背景技术

金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌，该菌在自然界中广泛存在于空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中。人和动物均有较高的带菌率，健康人的咽喉、鼻腔、皮肤、头发等常带有产肠毒素(SE)的菌株，食品受其污染的机会很多。今年来，美国疾控控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食品中毒，占整个细菌性食物中毒的33％，加拿大则更多，占到45％，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。所以，对金黄色葡萄球菌的快速、准确检验是保证人类健康的必要手段。

传统的检测细菌的方法包括了生化培养、分离鉴定，检验程序复杂繁琐、报告检验结果大致需4～7d，耗时太长，而且检测灵敏度低。所以建立快速而准确的检测方法一直病原微生物检验研究的核心问题。免疫测定法，以其准确性、特异性、适用范围宽、检测速度快以及费用低等特点，成为检验中广泛应用的方法之一。

免疫传感器开始应用于食源性致病菌的检测要追溯到上世纪70年代，是利用抗原抗体特异免疫反应与高灵敏传感器件相结合构成的一种生物传感器件，它具有制备简便、特异性好、操作快速、灵敏的特点，因此将免疫传感技术用于食品中金黄色葡萄球菌的检测是当前一个新的发展方向。目前，国内外有食品中致病菌的免疫分析已有一些文献报告，但大多采用酶联免疫分析(ELISA)法测定。有关免疫传感技术的研究也有一定报道，如采用免疫磁珠捕获法结合经典PCR技术检测食品中的沙门氏菌、单增李斯特氏菌、大肠杆菌0157：H7、志贺氏菌等致病菌；但这些工作离实际应用仍有相当距离，因此，用微间距叉指阵列电极方法开展食品中金黄色葡萄球菌高通量的快速分析检测是一项非常有意义的工作。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种基于微间距阵列电极的免疫定量传感器检测金黄色葡萄球菌的试剂盒及方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

一种基于微间距阵列电极的免疫定量传感器检测金黄色葡萄球菌的试剂盒，包被底物为金黄色葡萄球菌多克隆抗体，一抗为金黄色葡萄球菌单克隆抗体，阳性对照标准品为金黄色葡萄球菌标准菌株。

在上述方案中优选的是，阴性对照标准品为PBS缓冲液，封闭液为浓度为3％的BSA溶液，二抗为碱性磷酸酶标记的山羊抗鼠IgG(H+L)，底物溶解液为AAP浓度为1mmol/L和AgNO₃浓度为5mmol/L的灭菌甘氨酸-NaOH溶液。

在上述任一方案中优选的是，PBS缓冲溶液的制备方法：

加超纯水稀释至1000mL。

在上述任一方案中优选的是，封闭液的制备方法：BSA3g，加100mL灭菌的0.01mol/LPBS配制。

在上述任一方案中优选的是，还包括一抗的稀释液为含0.1％BSA的PBS溶液。

在上述任一方案中优选的是，还包括二抗的稀释液，所述稀释液包括浓度如下的各组分：10mmol/LHEPES，0.15mol/LNaCl，0.1％Tween20，0.1％BSA。

在上述任一方案中优选的是，所述底物溶解液的配制方法为：用灭菌的0.1mol/L甘氨酸-NaOH溶液配制AAP浓度为1mmol/L和AgNO₃浓度为5mmol/L的溶液，4℃储存一周。

在上述任一方案中优选的是，所述试剂盒包括包被微间隙生物芯片96T/盒，阳性对照液4mL×1瓶；阴性对照液4mL×1瓶；一抗120μL×1瓶；酶标二抗120μL×1瓶；抗体稀释液30mL×1瓶；底物溶解液30mL×1瓶；AAP1g×1瓶，AgNO₃1g×1瓶。

所述免疫定量传感器包括由叉指式双电极组成的微间距阵列电极，所述微间距阵列电极包括一对梳形微电极，每个梳形微电极均有多个叉指交叉排列形成叉指形状，所述微间距阵列电极的正电极和负电极的梳形齿宽均为20-100μm，电极间隙为20-100μm，且微间距阵列电极的表面固定有100μL的金黄色葡萄球菌多克隆抗体，该金黄色葡萄球菌多克隆抗体浓度为8μg/mL。

本发明还提供一种应用所述试剂盒的基于微间距阵列电极的免疫定量传感器检测金黄色葡萄球菌的方法，包括方法以下各步骤：