[发明专利]基于微间距阵列电极的免疫定量传感器检测金黄色葡萄球菌的试剂盒及方法

权利要求书

1.基于微间距阵列电极的免疫定量传感器检测金黄色葡萄球菌的试剂盒，其特征在于，包被底物为金黄色葡萄球菌多克隆抗体，一抗为金黄色葡萄球菌单克隆抗体，阳性对照标准品为金黄色葡萄球菌标准菌株。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：还包括阴性对照标准品、封闭液、二抗和底物溶液，阴性对照标准品为PBS缓冲液，封闭液为浓度为3％的BSA溶液，二抗为碱性磷酸酶标记的山羊抗鼠IgG(H+L)，底物溶解液为AAP浓度为1mmol/L和AgNO₃浓度为5mmol/L的灭菌甘氨酸-NaOH溶液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，PBS缓冲溶液的制备方法：

加超纯水稀释至1000mL。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，封闭液的制备方法：BSA3g，加100mL灭菌的0.01mol/LPBS配制。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括一抗的稀释液为含0.1％BSA的PBS溶液。

6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括二抗的稀释液，所述稀释液包括浓度如下的各组分：10mmol/LHEPES，0.15mol/LNaCl，0.1％Tween20，0.1％BSA。

7.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述底物溶解液的配制方法为：用灭菌的0.1mol/L甘氨酸-NaOH溶液配制AAP浓度为1mmol/L和AgNO₃浓度为5mmol/L的溶液，4℃储存一周。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括包被微间距生物芯片96T/盒，阳性对照液4mL×1瓶；阴性对照液4mL×1瓶；一抗120μL×1瓶；酶标二抗120μL×1瓶；抗体稀释液30mL×1瓶；底物溶解液30mL×1瓶；AAP1g×1瓶，AgNO₃1g×1瓶。

9.一种应用权利要求1至8中任一项所述试剂盒的基于微间距阵列电极的免疫定量传感器检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于：包括方法以下各步骤：

(1)以PBS缓冲溶液稀释的金黄色葡萄球菌多克隆抗体，然后包被在96孔微间距阵列电极芯片孔中，每孔100μL，4℃孵育过夜；用超纯水清洗微间距叉指阵列电极三次，将清洗后的电极的每孔加入200μL封闭液，在37℃恒温孵育1小时，弃去封闭液，超纯水洗涤三次后，真空抽干过塑，4℃冷藏保存；

(2)将金黄色葡萄球菌标准菌株浓度为10⁸CFU/mL的菌液100℃水浴加热15分钟，作为阳性对照标准品，

(3)分别取一系列不同浓度的金黄色葡萄球菌样品溶液，将所述每一种浓度的金黄色葡萄球菌菌悬液和阳性对照标准品、阴性对照标准品分别加入到包埋有金黄色葡萄球菌多克隆抗体的所述免疫定量传感器上，并在37℃恒温反应30分钟；

(4)用超纯水洗涤三次后加入金黄色葡萄球菌单克隆抗体作为一抗，并在37℃恒温反应30分钟后再用超纯水洗涤三次，加入AP标记山羊抗鼠IgG(H+L)作为二抗，并在37℃恒温反应30分钟后再用超纯水缓冲液洗涤三次；

(5)在所述免疫定量传感器的每孔中加入100μL含AgNO₃底物溶液，并在37℃恒温避光反应15分钟后再用超纯水洗涤三次，电极晾干；

(6)将步骤(5)的免疫定量传感器的工作电极的正电极与电化学工作站的工作电极连接，电化学工作站对电极与参比电极复合，再与所述免疫定量传感器工作电极的负电极连接，并采用线性扫描伏安法在0-50mV点位范围检测，记录免疫定量传感器电流随电位变化的响应曲线，并计算其电导值。

10.根据权利要求9所述的基于微间距阵列电极的免疫定量传感器检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，加入浓度分别为10⁸CFU/mL、10⁷CFU/mL、10⁶CFU/mL、10⁵CFU/mL、10⁴CFU/mL的金黄色葡萄球菌样品溶液，和阴性对照。