[发明专利]用于孔石莼LAMP-LFD检测的引物和探针序列有效
| 申请号： | 201510795766.8 | 申请日： | 2015-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN105349648B | 公开（公告）日： | 2018-06-15 |
| 发明（设计）人： | 陈炯;周前进 | 申请（专利权）人： | 宁波大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 宁波奥圣专利代理事务所(普通合伙) 33226 | 代理人： | 何仲 |
| 地址： | 315211 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 石莼 引物 检测 探针序列 核苷酸序列 探针 内转录间隔区 检测灵敏度 编码序列 产物步骤 三对引物 探针杂交 基因库 扩增 登录 | ||
1.一种用于孔石莼LAMP-LFD检测的引物和探针序列，其特征在于根据基因库登录号为HQ902008的孔石莼内转录间隔区序列的编码序列设计LAMP的三对引物序列和一条探针序列，引物序列具体如下：
UpeITS-F3：5’- TAGCCTCACCTGAACTCAG-3’
UpeITS-B3：5’- ACGGATATCTCGGCTCTC-3’，
UpeITS-FIP：5’- CGGCTGAAATACAGAGGCTCGTATCCTTCGTGGCTCACA-3’，
UpeITS-BIP：5’- GTTATTCCGACGCTGAGGCAGCAGAATTCCGTGAGTCAT-3’，
UpeITS-LF：5’- TAGGTAGCTCGCTACTCCTAC-3’，
UpeITS-LB：5’- GTGGTCTCATCCGAAGACTC-3’， UpeITS-FIP的5’端为生物素标记；
探针序列如下：
UpeITS-HP：5’-GCAAGCGCGTGAGGGGTTAT-3’，5’端为异硫氰酸荧光素标记。
2.根据权利要求1所述的用于孔石莼LAMP-LFD检测的引物和探针序列，其特征在于引物工作的LAMP反应体系：反应体系各成分的终浓度分别为：外引物UpeITS-F3和UpeITS-B3各0.2 µmol/L，内引物UpeITS-FIP和UpeITS-BIP各1.6 µmol/L，环引物UpeITS-LF和UpeITS-LB各0.4 µmol/L，dNTPs 1.4mmol/L，pH 8.8的Tris-HCl 20mmol/L，KCl 10mmol/L，MgSO4 6.5mmol/L，(NH4)2SO4 10mmol/L，Triton X-100 0.1%，8U Bst DNA聚合酶大片段和2µL样品模板，加双蒸水使反应体系总体积为25 µl。
3.根据权利要求1或2所述的用于孔石莼LAMP-LFD检测的引物和探针序列，其特征在于LAMP 反应条件：将上述反应体系进行扩增反应，扩增反应温度为63℃，扩增反应时间为50min。
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