[发明专利]一种具有片段选择性纯化能力的高效DNA纯化磁珠试剂有效
| 申请号： | 201510794591.9 | 申请日： | 2015-11-17 |
| 公开（公告）号： | CN106701737B | 公开（公告）日： | 2020-07-31 |
| 发明（设计）人： | 张介中;李珊珊;玄兆伶;李大为;梁峻彬;陈重建 | 申请（专利权）人： | 安诺优达基因科技（北京）有限公司;浙江安诺优达生物科技有限公司;安诺优达(义乌)医学检验有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C40B50/06;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 北京彩和律师事务所 11688 | 代理人： | 闫桑田 |
| 地址： | 100176 北京市北京经济技*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 具有 片段 选择性 纯化 能力 高效 dna 试剂 | ||
1.一种二代测序文库快速构建方法，其包括：
步骤A：将希望进行测序的DNA片段进行末端修复并进行磁珠纯化，得到平末端DNA片段，所述希望进行测序的DNA片段的量为0.1～10ng；
步骤B：将所述平末端DNA片段进行3'端加A，得到3'端加A的DNA片段；
步骤C：将所述3'端加A的DNA片段加接头并进行结合液纯化，得到加接头DNA片段；和
步骤D：将所述加接头DNA片段进行PCR扩增，得到扩增产物，对所述扩增产物进行结合液纯化，并洗脱与磁珠结合的所述扩增产物；
其中，所述磁珠纯化使用下述DNA纯化磁珠试剂进行，所述结合液纯化使用下述结合液进行；
所述DNA纯化磁珠试剂是具有片段选择性纯化能力的DNA纯化磁珠试剂，其包含：
0.05～1重量％的羧基修饰磁珠，
20～25重量％的PEG10000～15000，
1.9～2.3M的NaCl，
5-50mM的Tris-HCl，以及
0.5～5mM的EDTA，
并且，该DNA纯化磁珠试剂的pH值为7.5～8.5；
所述结合液是用于具有片段选择性纯化能力的DNA纯化磁珠试剂的结合液，其包含：
20～25重量％的PEG10000～15000，
1.9～2.3M的NaCl，
5-50mM的Tris-HCl，以及
0.5～5mM的EDTA，
并且，该结合液的pH值为7.5～8.5。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其中，所述步骤B中将所述平末端DNA片段进行3'端加A并进行结合液纯化，得到3'端加A的DNA片段。
3.下述具有片段选择性纯化能力的DNA纯化磁珠试剂用于权利要求1所述的二代测序文库快速构建方法的用途，其中所述磁珠纯化使用该具有片段选择性纯化能力的DNA纯化磁珠试剂进行；
该具有片段选择性纯化能力的DNA纯化磁珠试剂包含：
0.05～1重量％的羧基修饰磁珠，
15～30重量％的PEG10000～15000，
1.9～2.3M的NaCl，
5-50mM的Tris-HCl，以及
0.5～5mM的EDTA，
并且，该具有片段选择性纯化能力的DNA纯化磁珠试剂的pH值为7.5～8.5。
4.下述用于具有片段选择性纯化能力的DNA纯化磁珠试剂的结合液用于权利要求1所述的二代测序文库快速构建方法的用途，其中所述结合液纯化使用该用于具有片段选择性纯化能力的DNA纯化磁珠试剂的结合液进行；
用于具有片段选择性纯化能力的DNA纯化磁珠试剂的结合液包含：
15～30重量％的PEG10000～15000，
1.9～2.3M的NaCl，
5-50mM的Tris-HCl，以及
0.5～5mM的EDTA，
并且，该用于具有片段选择性纯化能力的DNA纯化磁珠试剂的结合液的pH值为7.5～8.5。
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