[发明专利]一种使用磁微粒化学发光定量检测抗核小体抗体IgG的试剂盒及其制备方法和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学检测技术领域，具体涉及一种使用磁微粒化学发光定量检测抗核小体抗体IgG的试剂盒及其制备方法和检测方法。

背景技术

抗核小体抗体(anti-nucleosomeantibody，AnuA)主要是由B细胞产生的抗核小体分子的自身抗体。核小体是染色体的功能亚单位，是DNA与组蛋白形成的复合体，存在于细胞核中。在系统性红斑狼疮(SLE)发生中，核小体是主要的自身抗原，抗核小体抗体是SLE的早期的指标之一。许多文献认为抗核小体抗体是诊断SLE很好的标志，它优于抗dsDNA，敏感度高，且有很高的特异度。研究表明，核小体是SLE的主要自身抗原，可能与SLE发病及病理变化直接相关。SLE患者细胞凋亡异常导致的核小体过度释放，可能是本病免疫异常的主要诱发环节之一。核小体及其特异性自身抗体除了在致病机制方面成为近年来SLE研究的最活跃的领域，抗核小体抗体在临床中对SLE诊断和治疗的作用也得到重视。临床研究提示，抗核小体抗体与SLE疾病活动性及狼疮性肾炎的发生明显相关，可能是SLE的特异性抗体之一。靶器官中免疫复合物的沉积和炎性介质(包括补体)的大量活化是引起SLE全身性组织炎症损伤的基本机制之一。核小体会成为多克隆B细胞活化剂，这可能与SLE疾病的起始阶段有关；但更重要的是，核小体是SLE中致病性T辅助细胞识别的自身抗原，不仅引起同源B细胞产生核小体特异性自身抗体，而且引起抗DNA抗体和抗组蛋白抗体的形成。文献报道，AnuA在抗ds-DNA阴性的SLE患者中有很高的阳性率(可达60％～65％)，因此AnuA对SLE患者更具有诊断价值。

中国专利CN103105489A公开了检测自身免疫性疾病抗体的免疫印迹试剂盒及其制备方法，涉及一种检测多种自身免疫性疾病相关抗体的免疫印迹试剂盒，解决目前尚无用于多种自身免疫性疾病体检筛查的免疫印迹产品技术上的不足:在所述的硝酸纤维素膜或尼龙膜上含有:分别由dsDNA、Sm/RNP、CCP、SSA，SSB,GAD、ICA、IA-2A、TG，AMA-M2共10种中的至少两种天然或重组抗原包被而成的两条以上平行的检测线，1条高浓度质控带，1条中浓度质控带及1条低浓度质控带。该专利公开的是一种膜条免疫法，更能说明膜条免疫法存在的灵敏度较低、线性范围窄、重复性差和反应时间长的问题。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明提供一种使用磁微粒化学发光定量检测抗核小体抗体IgG的试剂盒，其能够以较低的成本制备得到，且能够实现抗核小体抗体IgG准确和高精确地定量测定。

本发明是通过如下技术方案来实现的：一种使用磁微粒化学发光定量检测抗核小体抗体IgG的试剂盒，所述试剂盒包括：抗核小体抗体IgG校准品、抗核小体抗体IgG试剂1号、抗核小体抗体IgG试剂2号、抗核小体抗体IgG磁分离试剂、抗核小体抗体IgG质控品和清洗液。

进一步的，所述抗核小体抗体IgG校准品包括6个液体校准瓶，所述液体校准瓶内目标浓度分别为0、5、20、50、100、200RU/mL的抗核小体抗体IgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；

所述抗核小体抗体IgG试剂1号为1个含有5mL生物素标记的核小体抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶；

所述抗核小体抗体IgG试剂2号为1个含有15mL碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体和牛血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶；

所述抗核小体抗体IgG磁分离试剂为1个含有5mL链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清白蛋白的Tris缓冲液瓶；所述抗核小体抗体IgG质控品包括2个质控瓶，所述质控瓶内的浓度的范围分别为：16-24RU/mL和80-120RU/mL。

所述试剂盒检测原理为将待测样品、所述抗核小体抗体IgG试剂1号混合温育，样品中的抗核小体抗体IgG与核小体抗原特异性结合，再加入包被链霉亲和素的磁微粒，抗核小体抗体IgG与核小体抗原的免疫复合物被吸附到磁微粒表面，洗涤去除未结合的抗体和杂质，加入抗核小体抗体IgG试剂2号并混合温育。碱性磷酸酶标记(ALP)的羊抗人IgG抗体与已经结合在磁珠上的抗核小体抗体IgG特异性结合。洗涤去除未结合的抗体和杂质后加入化学发光底物，ALP催化底物发光，测定相对发光强度(RLU)。在一定范围内RLU与样品中抗核小体抗体IgG浓度呈正比，通过RLU就可以从标准曲线上计算出待测样品的抗核小体抗体IgG含量。

本发明采取的又一技术方案是：一种抗核小体抗体IgG的磁微粒化学发光定量检测试剂盒的制备方法，所述试剂盒的制备方法包括以下步骤：