[发明专利]一种利用qRT-PCR鉴定啤酒大麦Gairdner品种纯度的方法

说明书

本发明公开了一种利用qRT‑PCR鉴定啤酒大麦Gairdner品种纯度的方法。本发明方法根据双向电泳技术发现的啤酒大麦Gairdner标志蛋白BMAI‑1设计特异引物，利用qRT‑PCR技术测定不同纯度Gairdner种子中标志蛋白的相对表达量或相对含量，建立标志蛋白相对表达量与Gairdner纯度的相关性曲线，利用该相关性曲线检测对未知纯度的Gairdner样品。本发明可准确高效地检测啤酒大麦Gairdner的纯度，在制麦和啤酒行业具有良好的市场应用前景。

技术领域

本发明涉及一种利用qRT-PCR鉴定啤酒大麦Gairdner品种纯度的方法，属于制麦和啤酒酿造领域。

背景技术

啤酒大麦是是啤酒生产的主要原料，其品质优劣是决定啤酒质量的关键。啤酒大麦品种不同，大麦籽粒的饱满度和粗蛋白含量及麦芽的品质如水分、浸出物、色度、总蛋白及可溶性氮含量等指标也有所差异，最终也影响着成品啤酒的泡持性、浊度、成熟度和风味等质量指标。除了遗传特性之外，啤酒大麦的酿造品质也受环境因素和农艺措施的影响，对于某些品质性状，环境因子起着更大的决定作用。我国大麦主要产区相对集中，主要分布在长江流域、黄河流域和青藏高原，按酿造性能可将啤酒大麦产区分为三类：甘肃新疆产区，东北产区和江浙产区。啤酒工业的发展促进了对大麦原料的需求，其中西北和黑龙江等地啤酒大麦发展较快。20世纪90年代，我国啤酒行业主要使用进口啤酒大麦，随着国际市场的不稳定和价格上升，进入21世纪后，啤酒企业逐渐重视和使用国产啤酒大麦。尽管国内大麦产量不断上升，但农艺性状优良、适宜于酿造的啤酒大麦品系缺乏，在质量上仍存在大麦质量指标极差大、波动大、对应麦芽脆度低、微粉浸出物低，品质均一性差等质量缺陷，大部分只能做饲料用，而能用于啤酒行业的啤酒大麦只有150万吨左右。因此，每年需从澳大利亚、加拿大、法国等欧洲国家进口啤酒大麦，以满足国内啤酒行业发展的需要。

由于进口大麦品质优售价高，因而市场上常出现将混级大麦或国产质量稍好的大麦混入进口一级大麦等以次充好的情况，这不仅造成了对外贸易或采购的经济损失，更影响了以此为原料酿造的啤酒的品质，对生产周期、生产设备也可能造成一定影响，影响啤酒行业的经济效益。进口大麦的品种和质量直接关系到麦芽的制作和啤酒酿造的工艺，这就要求检验检疫部门能够准确地对进口大麦的品种和品种纯度进行鉴定。同时由于进口啤酒大麦成本高，国产啤酒大麦质量日益完善，加上相关部门对其品种鉴定手段还不完善，使得进口啤酒大麦在品种真实性问题上还存在一些挑战。因此，有必要对进口啤酒大麦进行品种纯度及真实性鉴定。

目前用于大麦品种鉴定的方法有感官评价法、物理化学法、DNA分子标记法、同工酶电泳法等，但这些鉴定方法只能对品种进行判断，无法鉴定大麦样品的纯度，此外在品种判断上也存在不确定性、假阳性或成本高、操作难度大等缺点。普遍被认可的方法是醇溶蛋白SDS-PAGE电泳法，此方法可同时判断大麦样品的品种和纯度，具有较高的准确性，然而，由于该方法需对大麦样品进行四分法取样，将取样得到的每一粒大麦种子的醇溶蛋白进行提取及SDS-PAGE电泳、染色、脱色及与标准图谱的比较后，才能判断其品种及纯度，工作量大，耗时长，因此存在一定的局限性。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术鉴定啤酒大麦Gairdner品种纯度的方法。本发明利用啤酒大麦Gairdner品种标志蛋白BMAI-1(由基因IMAI-1编码)，通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术建立其相对表达量与其纯度的相关性曲线，并拟合线性方程，通过该相关性曲线检测未知纯度Gairdner大麦样品的纯度。本发明方法检测的未知Gairdner大麦样品的纯度与传统SDS-PAGE方法检测的纯度相差无几，检测时间明显缩短，工作量大大降低。同时，本发明适用于其它啤酒大麦品种的纯度鉴定。

所述方法是针对Gairdner的品种标志蛋白，利用qRT-PCR技术建立该标志蛋白相对表达量与Gairdner品种纯度的相关性曲线，从而对Gairdner大麦样品纯度进行定量检测。