[发明专利]一种利用qRT-PCR鉴定啤酒大麦Gairdner品种纯度的方法

权利要求书

1.一种利用实时荧光定量PCR技术鉴定啤酒大麦Gairdner品种纯度方法，其特征在于，所述方法是针对Gairdner的品种标志蛋白，利用qRT-PCR技术建立该标志蛋白相对表达量与Gairdner品种纯度的相关性曲线，从而对Gairdner大麦样品纯度进行定量检测；

所述Gairdner的品种标志蛋白为由基因IMAI-1编码的α-淀粉酶抑制剂BMAI-1。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述qRT-PCR的引物为：标志蛋白编码基因IMAI-1特异引物如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，内参基因为ACTIN。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述内参基因的特异引物如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述相关性曲线为y＝0.0129x-0.2748，其中y为样品中标志蛋白编码基因IMAI-1相对于纯Gairdner大麦的IMAI-1基因的相对表达量，x为Gairdner大麦样品纯度。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法是对未知Gairdner大麦样品进行qRT-PCR反应，通过标志蛋白的相对表达量和相关性曲线，计算未知样品中Gairdner大麦的纯度。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法具体是：(1)人工制备不同纯度Gairdner啤酒大麦样品；(2)提取不同纯度Gairdner啤酒大麦样品的总RNA；(3)根据标志蛋白编码基因IMAI-1设计如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的特异引物，以肌动蛋白actin编码基因ACTIN为内参基因，分别进行qRT-PCR，获得标志蛋白基因及内参基因的Ct值，以2^-ΔΔCt表示标志蛋白基因的相对表达倍数；(4)以样品纯度为横坐标，以标志蛋白基因相对表达量即2^-ΔΔCt为纵坐标，绘制标志蛋白基因相对表达量与大麦样品纯度的拟合线性方程；(5)对任一未知大麦样品，提取总RNA，然后使用步骤3的方法进行qRT-PCR得到未知样品中标志蛋白基因相对表达量y，将y代入拟合线性方程，即得未知样品中Gairdner大麦的纯度x。