[发明专利]一种便携家庭式梅毒快速检测试纸条

权利要求书

1.一种便携家庭式梅毒快速检测试纸条，其特征在于，所述的便携家庭式梅毒快速检测试纸条包括样本垫、胶体金结合垫、NC硝酸纤维素膜、吸附垫以及PVC胶板，梅毒抗原作为捕获抗原被固定到硝酸纤维素膜上，胶体金标记试剂吸附在结合垫上。

2.如权利要求1所述的便携家庭式梅毒快速检测试纸条，其特征在于，以梅毒抗原TP17和TP47构建大肠杆菌表达载体，梅毒抗原的表达、纯化和鉴定方法为：

利用大肠杆菌密码子的偏嗜性人工设计并合成基因，合成的基因两端含有BamHI和NotI位点，表达载体为pETDuet-1，该表达载体含有T7启动子，在IPTG的诱导下，外源基因在T7RNA聚合酶的作用下转录表达；

所述表达载体的C端含有His·Tag序列，表达的外援蛋白用金属螯合亲和层析法纯化，在设计目的基因时，插入12KD大小的分子伴侣肽链的表达基因，便于将表达的外援蛋白分泌到细胞周质中；

将合成的外源基因通过酶切链接插入到载体pETDuet-1中，转化大肠杆菌BL21中，通过IPTG诱导表达，抗原以可溶性形式表达于细菌周质中，收集细菌，超声破碎，上清通过Ni²⁺金属螯合和分子筛层析，纯化的蛋白通过SDS-PAGE、Western-blot鉴定。

3.如权利要求1所述的便携家庭式梅毒快速检测试纸条，其特征在于，所述便携家庭式梅毒快速检测试纸条的制备方法包括：

步骤一、TP目的基因的设计和克隆；

步骤二、目的蛋白的表达和纯化；

步骤三、胶体金的制备；

步骤四、胶体金蛋白A的标记；

步骤五、试纸条的组装及干燥；

步骤六、检测及结果判定；

步骤七、胶体金试纸条的灵敏度及血液样本的检测。

4.如权利要求3所述的便携家庭式梅毒快速检测试纸条的制备方法，其特征在于，TP目的基因的设计和克隆的具体步骤为：

步骤一、通过美国国立生物技术信息中心网站，查找梅毒螺旋体TP-17和TP-47的全基因组序列；

步骤二、合成目的基因开放阅读框内的cDNA序列，并将合成好的序列克隆入pMD18-TSimple载体，在进行序列合成时，分别在目的序列的5’端和3’端插入BamHI和NotI的酶切位点，并利用这两种限制性内切酶将目的基因从pMD18-TSimple载体上剪切下来，进行琼脂糖凝胶电泳鉴定，回收电泳条带；

步骤三、将回收的目的条带通过去磷酸化酶处理后，与经同样限制性内切酶及去磷酸化酶处理的pETDuet-1载体在T4连接酶存在的条件下，16℃连接过夜；将连接好的载体电转到大肠杆菌DH10B菌种的感受态细胞中，涂布于含有50μg/ml氨苄抗生素的LB固体培养板中，37℃培养过夜；第二天挑取单克隆接种到含有50μg/ml氨苄抗生素的5mlLB液体培养基中，37℃，250rpm，震荡培养过夜；第三天利用小抽质粒提取试剂盒提取菌液中的质粒，进行BamHI和NotI双酶切并进行琼脂糖凝胶电泳鉴定；将具有目的条带的阳性质粒电转到大肠杆菌BL21菌种的感受态细胞中，重复以上操作，涂板，挑克隆进行液体培养后，通过BamHI和NotI双酶切及琼脂糖凝胶电泳进行鉴定，将含有目的条带的质粒或菌液进行测序。