[发明专利]一种用于检测先天性巨结肠及相关综合征的致病/易感基因的探针组及试剂盒

说明书

发明领域

本发明属于基因工程及分子遗传学领域，具体的说，涉及一种用于先天性巨结肠及相关综合征的致病/易感基因的个性化捕获、测序的探针组及试剂盒。

背景技术

先天性巨结肠(Hirschsprungdisease，HSCR)又称肠无神经节细胞症，是导致功能性肠梗阻的最常见的小儿消化道畸形，属典型肠神经系统先天发育异常性疾病。主要临床表现是胎粪排出延迟或无胎粪排出，继发腹胀及肠梗阻。我国属高发病率国家。目前我国统计活产儿发病率约为1/3,000，男性明显高于女性(约4:1)，即每年有近5500名新生儿会出现该种出生缺陷，仅次于先天性肛门直肠畸形。研究表明70％的HSCR患儿为单纯型，另有12％合并常染色体疾病，18％合并其他器官、系统先天畸形，即常常以综合征的形式出现。目前推测先天性巨结肠是一种多因素参与的复杂疾病，其发生、发展与遗传因素及环境因素密切相关。患者亲属的患病风险显著高于一般正常人群(最多可高至正常人群的200倍)，因此寻找、确定首诊患者的致病/易感基因对于家庭其他成员的再发风险评估乃至遗传咨询都至关重要。

新生儿HSCR患者因临床表现多样、发病轻重程度不一、伴发症状各异，非常容易漏诊造成严重后果；虽然近年来外科治疗手段的不断改进使得本病死亡率大大降低，但仍有很多患儿在治疗后出现一系列并发症，造成进一步处理困难甚至是难以矫治的遗留问题，严重影响患儿健康，给社会和家庭带来了沉重的经济负担。另一方面，约有30％的患儿由于伴发其他器官、系统异常，可表现为严重的出生缺陷，或随着患儿的生长发育逐渐表现出神经系统、内分泌、颅面部、心脏结构、泌尿生殖系统和色素组织等多种异常，显著影响患儿的生活质量乃至危及生命。鉴于此，寻求疾病的致病/易感基因并对患儿家庭进行细致、精确的遗传咨询，以及判断有无伴发其他畸形对指导疾病治疗和判断预后很有意义，同时对完善疾病病因学假说也有很大帮助。近年来通过连锁分析、全基因组关联分析研究(Genome-wideassociationstudies，GWAS)、基因敲除以及动物模型研究发现并确定了15个与HSCR相关的致病基因，可以解释部分表型与基因型之间的关联。尽管如此，在所有已知致病基因累积发现的突变仅能解释不足10％的患者的发病原因，高度提示其他致病/易感基因或危险因子的存在。目前对于已知HSCR致病基因的检测，只能在确定目标检测基因后采用逐一设计引物、PCR扩增、Sanger法测序、与reference序列比对的方法进行，费时费力且检测费用不菲；而对于在已知致病基因没有发现严重突变的患儿，其分子遗传学诊断往往难以确立，这些都对遗传咨询及许多相关问题的解决造成了巨大的障碍。

过去十五年人类在分析单独个体基因组的课题上投入了大量精力，也取得了显著的成果。最初分析一个单独个体的若干目标基因需要耗时几个月，费用高达上万美元。然而现在，这种检测已经变成了越来越简单的一个过程。基因组序列测定的费用越来越低，收集个体样本遗传信息的速度也越来越快。第二代高通量测序技术(next-generationsequencingtechnology)具有快速、准确、低成本的优点，可同时对多个基因的各种类型突变进行检测，已经被广泛应用于遗传缺陷的病因检测和分子遗传学诊断，然而到目前为止，一直尚未有专门针对巨结肠及相关疾病的致病/易感基因检测的高通量探针、芯片或试剂盒，使得本病相关领域的进展严重滞后，发病率高居不下，遗传咨询和必要的产前干预措施无法施行，不仅给患者和其家庭带来的巨大的痛苦和沉重的经济负担，也严重阻碍了我国整体人口素质的大幅度提高。

综上所述，开发一种高效、准确、快速、低价的HSCR试剂盒，用于先天性巨结肠及相关综合征的致病/易感基因的基因筛查和分子遗传学诊断，意义非常重大。

发明内容