[发明专利]一种纯化脊髓灰质炎病毒液的方法

权利要求书

1.一种纯化病毒液的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)待纯化的病毒超滤浓缩液进行蔗糖密度梯度离心；

(2)监测糖度，收集合并处于相同位置的离心液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)的蔗糖密度梯度离心方法为：

依次从离心机边孔以50～100rpm依次泵入超离缓冲液，病毒超滤浓缩液,低浓度蔗糖溶液，最后以50～150rpm泵入高浓度蔗糖溶液直至中孔流出液体；离心转速为28000～35000rpm，离心时间为：6～20小时，离心温度为2～8℃。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，超离缓冲液与病毒超滤浓缩液的体积比为1：5～1：10；病毒超滤浓缩液与低浓度蔗糖溶液的体积比为1：1～2：1；高浓度蔗糖加入标准为只要离心机中空流出液体即可停止加入高浓度蔗糖。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述低浓度蔗糖质量百分比为25％～45％，高浓度蔗糖质量百分比为55％～60％。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，超离缓冲液选自0.1～0.5M的PB、PBS和PBST中的一种。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，步骤(2)的收集合并处于相同位置的离心液是收集并合并处于相同位置的离心液，其中含实心病毒的离心液位于糖度54％的糖度位置，含空心病毒和少量实心病毒的离心液位于50％-54％的糖度位置。

7.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，所述的病毒为脊髓灰质炎病毒。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述脊髓灰质炎病毒为脊髓灰质炎病毒减毒株Sabin株I型、II型、III型。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，当脊髓灰质炎病毒为Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ时，超离缓冲液的pH值为：6.0～7.0；当脊髓灰质炎病毒为Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅲ型时，超离心缓冲液的pH值为：6.5～7.5。

10.权利要求1-9任一所述方法在制备脊髓灰质炎病毒灭活疫苗中的应用。