[发明专利]检测大麻醇的电化学纳米免疫传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测大麻醇的电化学纳米免疫传感器，其特征在于，所述传感器以壳聚糖为桥联剂将纳米金和辣根过氧化物酶固定于电极表面，所述纳米金吸附有抗大麻醇抗体；所述传感器由如下方法制备得到：

(1)对电极进行预处理，然后在电极上包被壳聚糖溶液；

(2)以壳聚糖为桥联剂将纳米金和辣根过氧化物酶包被在电极上；

(3)继续在电极上包被抗大麻醇抗体；

(4)封闭液封闭后即得。

2.根据权利要求1所述的电化学纳米免疫传感器，其特征在于，所述抗大麻醇抗体为单克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的电化学纳米免疫传感器，其特征在于，所述电极为玻碳电极。

4.根据权利要求1所述的传感器，其特征在于，步骤(1)中，所述壳聚糖溶液以如下方法制得：将壳聚糖溶于醋酸溶液得到壳聚糖溶液，备用。

5.根据权利要求4所述的传感器，其特征在于，将2g壳聚糖溶于100mL体积百分比为2％的醋酸溶液中，搅拌3h得到2％的壳聚糖溶液，备用。

6.根据权利要求1所述的传感器，其特征在于，步骤(2)中，所述包被为将电极置于由纳米金溶液和辣根过氧化物酶溶液组成的混合溶液中进行包被。

7.根据权利要求6所述的传感器，其特征在于，所述纳米金溶液以如下方法制得：取0.01g/100mL氯金酸溶液100mL，加入1g/100mL的柠檬酸钠溶液4mL混匀，置于微波炉中低火保持8-10min，待自然冷却后用超纯水补充至104mL，即得纳米金溶胶，置于4℃避光保存备用；

所述辣根过氧化物酶溶液以如下方法制得：将辣根过氧化物酶溶于磷酸缓冲液中，即得辣根过氧化物酶溶液。

8.根据权利要求7所述的传感器，其特征在于，将0.02g辣根过氧化物酶溶于10mL0.01M pH值为7.4的磷酸缓冲液中，即得2.0g/L辣根过氧化物酶溶液。

9.根据权利要求1所述的传感器，其特征在于，步骤(4)中，所述封闭液为牛血清白蛋白。

10.根据权利要求4所述的传感器，其特征在于，其制备方法包括如下步骤：

(1)将玻碳电极预处理后，取质量百分比浓度为2％的壳聚糖溶液滴满处理后的玻碳电极表面，在45℃干燥30min，使玻碳电极表面凝胶化；取出待冷却至室温，再浸于浓度为1mol/L的NaOH溶液中5min，用超纯水冲洗掉NaOH溶液，之后浸于超纯水中30min，彻底清除NaOH离子；取出，25℃干燥10min；

(2)将玻碳电极置于纳米金/辣根过氧化物酶混合溶液中至少24h，得到GNPs/HRP电极；

(3)滴加5μL浓度不低于0.5mg/mL的小鼠抗大麻醇单克隆抗体于制得的GNPs/HRP电极表面，30℃孵育干燥1h；

(4)超纯水冲洗三次，然后将玻碳电极置于1％的牛血清白蛋白溶液中，37℃温育1h，以封闭非特异性位点；

(5)以含0.05％Tween-20的PBST溶液清洗未结合的BSA，30℃孵育干燥1h，即得用于大麻醇检测的电化学纳米免疫传感器，置于4℃PBS缓冲环境中待用。

11.权利要求1～10任一项所述的电化学纳米免疫传感器在大麻醇检测中的应用。