[发明专利]一株高效降解琼胶多糖的海洋杆菌

权利要求书

1.一株高效降解琼胶多糖的海洋杆菌Marinobacter adhaerens G4，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.11016。

2.利用保藏号为CGMCC No.11016的菌株Marinobacter adhaerens G4制备β-琼胶酶粗酶的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将活化的海洋杆菌G4接种至添加有微生物生长所必需的碳源和氮源的海水中培养数天；

(2)收集菌液，离心后取上清液，采用(NH₄)₂SO₄盐析沉淀法提取胞外蛋白；

(3)将获得的蛋白沉淀用中性缓冲液复溶。

3.根据权利要求2所述的β-琼胶酶粗酶制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，用于沉淀胞外蛋白的(NH₄)₂SO₄的饱和度为65～80％，并且在加入所述(NH₄)₂SO₄后，将上清液低温静置过夜后再通过离心收集蛋白沉淀。

4.根据权利要求2或3所述的β-琼胶酶粗酶制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中用于蛋白沉淀复溶的中性缓冲液为pH6～8的PBS磷酸缓冲液或Tris-HCl缓冲液。

5.根据权利要求4所述的β-琼胶酶粗酶制备方法，其特征在于：还包括步骤(4)：使用截留分子量为10KD的超滤离心管对由所述步骤(3)复溶获得的粗酶液进行离心浓缩。

6.根据权利要求5所述的β-琼胶酶粗酶制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中用于离心浓缩的超滤离心管选择型号为Ultra-15、截留分子量为10KD的超滤离心管，离心浓缩处理时的离心力为4000～5000g。

7.利用保藏号为CGMCC No.11016的菌株Marinobacter adhaerens G4产β-琼胶酶粗酶制备新琼四糖的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将所述β-琼胶酶粗酶和琼脂底物加入pH6～8的磷酸盐缓冲液中，30～40℃下恒温反应至少24h；

(2)加入适量体积比为25：24：1的酚/氯仿/异戊醇，振荡混匀；

(3)将溶液离心至液面出现分层，吸取最上层清液，加入乙醇，离心收集沉淀产物。

8.根据权利要求7所述的新琼四糖制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，乙醇在上清液中的终浓度为70％～90％(v/v)；离心收集沉淀产物时，相应离心力为10000g。