[发明专利]一种提高棉花转基因效率的方法

权利要求书

1.一种提高棉花转基因效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将包含有目的基因的农杆菌活化到转化状态后，在6000-11000rpm条件下离心并重悬，得到农杆菌重悬液；

S2、将棉花无菌苗茎尖浸泡到农杆菌重悬液中，在20-25℃下，4800-8200rpm离心5-10min，转移到无菌玻璃器皿中，静置并超声波处理15-20分钟；

S3、处理结束后，将侵染后的棉花茎尖，取出，用无菌滤纸吸干残留的菌液，转移到含有浓度为0.2-0.5mg/L的6-糖基氨基嘌呤、浓度为0.1-0.3mg/L的吲哚-3-乙酸和浓度为0.05～0.2mg/L的α-萘乙酸的共培养培养基上进行共培养；

S4、共培养结束后，将侵染后的棉花茎尖在选择压力下进行筛选。

2.根据权利要求1所述的一种提高棉花转基因效率的方法，其特征在于，所述共培养培养基为改良MS+0.04mg/LNAA+0.75mg/L6-BA+0.075mg/LIBA+35g/L蔗糖培养基。

3.根据权利要求2所述的一种提高棉花转基因效率的方法，其特征在于，所述改良MS包括营养元素和有机物，营养元素包括蛋氨酸锰10mg/L、，一水硫酸锌5mg/L、一水硫酸亚铁17mg/L、氨基酸螯合镁5mg/L、硒蛋氨酸5.5mg/L、植酸酶0.75mg/L、碱式硫酸铜4.5mg/L、吡啶酸铬0.065mg/L、碘酸钙0.3mg/L、赖氨酸6mg/L、三氯化六氨合钴0.065mg/L、蛋白锗0.75mg/L、碘酵母6mg/L。

4.根据权利要求3所述的一种提高棉花转基因效率的方法，其特征在于，所述有机物包括盐酸硫胺素10mg/L、盐酸吡哆醇3mg/L、肌醇35mg/L、环己六醇27mg/L。

5.根据权利要求1所述的一种提高棉花转基因效率的方法，其特征在于，所述棉花无菌苗茎尖为生长2-3天的棉花无菌苗茎尖。

6.根据权利要求1所述的一种提高棉花转基因效率的方法，其特征在于，所述步骤S2中超声波输出功率为320±20W，超声波处理的频率为68KHz～72KHz。