[发明专利]肝癌相关microRNA检测试剂盒

权利要求书

1.一种肝癌相关microRNA检测试剂盒，其特征在于，包括有：针对每种待检测的肝癌相关microRNA有一级信号放大探针、二级信号放大探针、三级信号放大探针，以及捕获探针，所述肝癌相关microRNA选自包括:hsa-miR-138-5p、hsa-miR-122-5p、hsa-miR-101-3p、hsa-miR-21-5p、hsa-miR-326、hsa-miR-297、hsa-miR-520b、hsa-miR-181b-5p、hsa-miR-519b-3p、hsa-miR-602、hsa-miR-26a-5p以及hsa-miR-199a-5p，其中：

所述捕获探针用于连接目标核酸与一级信号放大探针，每条捕获探针从5’端到3’端依次为特异性P1序列、间隔臂序列、P2序列，针对不同目标基因的P2序列互不相同；

所述一级信号放大探针从5’端到3’端依次为：P4序列、间隔臂序列、P3序列，P3序列与P2序列互补配对；

所述二级信号放大探针从5’端到3’端依次为：P5序列、间隔臂序列、P6序列；

所述P4序列含有至少一个与P5序列互补配对的碱基片段，且每个与P5序列互补配对的碱基片段之间设有间隔臂序列；

所述三级信号放大探针从5’端到3’端依次为：P8序列、间隔臂序列、P7序列，所述P8序列5’端还修饰有荧光基团，针对不同目标核酸的荧光基团的颜色互不相同或发射波长互不相同；

所述P6序列含有至少一个与P7序列互补配对的碱基片段，且每个与P7序列互补配对的碱基片段之间设有间隔臂序列；

所述P2序列、P3序列、P4序列、P5序列、P6序列、P7序列、P8序列均为不存在发夹结构，各探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与整个检测体系的其它核酸之间均不存在特异性结合的序列；

所述待检测的肝癌相关miRNA的捕获探针的特异性P1序列包括：针对hsa-miR-138-5p的SEQ ID NO.1，针对hsa-miR-122-5p的SEQ ID NO.2，针对hsa-miR-101-3p的SEQ IDNO.3，针对hsa-miR-21-5p的SEQ ID NO.4，针对hsa-miR-326的SEQ ID NO.5，针对hsa-miR-297的SEQ ID NO.6，针对hsa-miR-520b的SEQ ID NO.7，针对hsa-miR-181b-5p的SEQ IDNO.8，针对hsa-miR-519b-3p的SEQ ID NO.9，针对hsa-miR-602的SEQ ID NO.10，针对hsa-miR-26a-5p的SEQ ID NO.11，针对hsa-miR-199a-5p的SEQ ID NO.12；

所述P2序列包括：SEQ ID NO.13～SEQ ID NO.24；所述P5序列包括：SEQ ID NO.37～SEQ ID NO.48，所述P7序列包括SEQ ID NO.61～SEQ ID NO.72；所述P4序列中的所述间隔臂序列为3—10个T；所述P6序列的所述间隔臂序列为2—10个T；P8序列为polyT；

所述P4序列包括：SEQ ID NO.25～SEQ ID NO.36，所述P6序列包括：SEQ ID NO.49～SEQ ID NO.60。

2.根据权利要求1所述的肝癌相关microRNA检测试剂盒，其特征在于，所述polyT为3-10个T。

3.根据权利要求1或2所述的肝癌相关microRNA检测试剂盒，其特征在于，所述一级信号放大探针中所述P4序列与P3序列之间的间隔臂序列选自5－20个T；二级信号放大探针中所述P5序列与P6序列之间的间隔臂序列选自5－10个T；三级信号放大探针中P7序列与P8序列之间的间隔臂序列选自3－10个T。

4.根据权利要求1或2所述的肝癌相关microRNA检测试剂盒，其特征在于，所述荧光基团选自：FAM、TET、JOE、HEX、Cy3、TAMRA、ROX、Texas Red、LC RED640、Cy5、LC RED705和AlexaFluor 488，且针对不同目标核酸的荧光基团互不相同。