[发明专利]一种瑞香狼毒总二萜的制备方法

说明书

本发明公开了一种瑞香狼毒总二萜的制备方法，属于植物提取技术领域。瑞香狼毒中总二萜由乙醇提取、乙酸乙酯萃取以及反相中压柱层析分离等三步获得。所制得的瑞香狼毒总二萜中的二萜含量高达90％以上。本方法采用反相ODS柱，依次以80％与95％甲醇溶液进行洗脱，有效除去了非二萜类杂质，工艺合理，并且本方法成本低廉，操作步骤简单，易于放大，非常适合规模化生产。

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，涉及一种瑞香狼毒总二萜的制备方法，特别是涉及一种采用萃取技术和反相ODS柱层析技术联用提取制备瑞香狼毒中总二萜的方法。

背景技术

瑞香狼毒(Stellerachamaejasme L.)系瑞香科狼毒属植物，俗名断肠草，分布于中、俄、蒙、朝等国，在我国主要产自北方各省区及西南地区，生于海拔2600～4200米干燥而向阳的高山草坡、草坪或河滩台地。其味苦辛，性平，有大毒，入肺脾肝经，根入药，有逐水祛痰、破积杀虫之功效。现代药理学研究表明瑞香狼毒具有很好的抗肿瘤活性，最新研究还发现其具有抗病毒、抗菌、抗惊厥和免疫调节等作用。目前，从瑞香狼毒中分离鉴定出的化学成分主要有二萜类、倍半萜类、黄酮类、香豆素类、木脂素类等，其中，瑞香狼毒中的二萜类成分含量极低，但具有很好的药理活性。如尼地吗啉(gnidimacrin)对人类白血病K562，胃癌Kato-Ⅲ、MKN-28、MKN-45等细胞系均具有强烈的抑制作用，其IC₅₀值可达0.12ng/mL(FengW,et al.CHINESE J CANCER RES,1996.17(02))；狼毒酯A～C(stelleralide A～C)显示出潜在的抗HIV活性，其EC₉₀值低至1nM(Asada Y,et al.ORG LETT,2011.13(11))；荛花酯J(wikstroelideJ)抑制人类非小细胞肺癌细胞A549的IC₅₀值为0.024μM，而机理研究进一步证明荛花酯J是拓扑异构酶Ⅱ的良好抑制剂，它能有效地诱导肿瘤细胞在G2～M期的凋亡(Liu L,et al.BIOORGAN MED CHEM,2014.22(15))。诸如此类，文献中对瑞香狼毒二萜药理作用研究的报道有很多，但鲜有对其提取制备方法的报道，这说明从事这方面的研究具有重要意义。

发明内容

本发明在前期研究瑞香狼毒化学成分的基础上，提供了一种快速制备瑞香狼毒药材中总二萜的新工艺。以瑞香狼毒药材为原料，经乙醇提取、乙酸乙酯萃取以及反相ODS中压柱层析等步骤，所得流份直接减压浓缩至干即可获得目标成分含量大于90％的瑞香狼毒总二萜部位。步骤为：

(1)取瑞香狼毒药材，粉碎，置于提取釜中，加入无水乙醇浸泡2～3小时后，在减压下50～60℃水浴加热前煮，冷凝回流，提取3～4次，每次2～4小时。合并提取液，负压下干燥至无醇味，得浸膏。

(2)将上述浸膏用纯水超声分散得分散液，置于分液漏斗中，加入乙酸乙酯萃取，重复3～4次。之后放去水层，合并乙酸乙酯层，在负压下蒸干，得萃取物。

(3)将上述萃取物以甲醇-水溶液分散后，湿法上样，过反相层析柱，依次以两个不同浓度的甲醇-水溶液洗脱，中压泵加压，流量控制在100～150mL/min，收集第二个甲醇-水流份，干燥即得瑞香狼毒总二萜。

上述步骤(1)中按液料比计提取药材所用无水乙醇的体积为药材质量的8～10倍。

上述步骤(2)中分散浸膏所用纯水的体积为浸膏质量的5～7倍，萃取所用乙酸乙酯的体积为分散液体积的2～3倍。

上述步骤(3)中分散萃取物所用甲醇-水溶液的体积浓度为80～85％，其体积为萃取物质量的1～2倍。

上述步骤(3)中反相柱层析所用填料为ODS，粒径为40～50μm。

上述步骤(3)中两次洗脱所用甲醇-水溶液的体积浓度依次为80～85％和95～100％，洗脱后收集第二次洗脱的甲醇-水流份。