[发明专利]一种银杏酮酯中黄酮类和有机酸类成分指纹图谱的检测方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于中药成分分析检测技术领域，涉及一种银杏酮酯中黄酮类和有机酸类成分指纹图谱的检测方法及其应用，具体涉及一种银杏酮酯中黄酮类和有机酸类药味成分指纹图谱的检测方法及其在含量测定中应用。

背景技术

银杏叶为银杏科植物银杏的干燥叶，性甘，苦，涩，平，归心、肺经，《中药志》中记载银杏叶能“敛肺气，平咳喘，止带浊”。银杏酮酯(GinkgoBilobaExtract，GEB50)是我国自主研发的新一代银杏叶提取物产品，已获得原国家二类新药，并通过了美国临床预审进入IND阶段，主要用于治疗心脑血管疾病及神经系统疾病。其中，现已获得我国国家食品药品监督管理局批准文号的银杏酮酯的制剂共8种(银杏酮酯原料药，银杏酮酯片，银杏酮酯颗粒，银杏酮酯胶囊，银杏酮酯分散片，银杏酮酯滴丸3种)。

我国虽是银杏叶资源大国，但出口产品仅用于食品添加剂或保健品，故质量标准不高。中药质量标准的提高成为中药发展的瓶颈，现代化的质量标准是提高国际竞争力的前提。根据2015版《中国药典》，目前，银杏酮酯的质量标准检测项包括：制法、性状、鉴别、检查(水分、炽灼残渣、重金属、黄酮苷元峰面积比、总银杏酸)、含量测定(总黄酮醇苷、萜类内酯)、贮藏、制剂。但银杏酮酯中仍有大部分尚不清楚的成分，只测定目标成分含量并不能真正反映其质量稳定，故指纹图谱分析、原型黄酮苷类成分的测定日益引起关注。

中药指纹图谱具有整体、宏观、模糊分析等特点，可通过对中药整体特征的描述，采用适当模糊处理方式，达到整体质量控制的目的，因此成为中药质量控制的有效手段。其中色谱指纹图谱分析可以使中药所含多种化学组分的整体特征可视化，从而披露出常规检验难以发现的质量问题。虽然银杏叶提取物的指纹图谱还未被编入《中国药典》，但银杏叶提取物中黄酮苷元本身的含量较低，如人为添加如槲皮素等黄酮苷元，则测得的总黄酮醇苷含量结果明显增高，表面上符合要求，实际影响药品内在质量。为保证生产原料质量稳定；为防止生产过程中掺假、掺杂现象；为保证不同批次原料药一致性，本课题拟将银杏酮酯指纹图谱与多成分含量测定相结合，提高现有质量标准。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种银杏酮酯中黄酮类和有机酸类成分指纹图谱的检测方法及其应用，采用优化条件的高效液相色谱方法首次建立了银杏酮酯中黄酮类和有机酸类成分的指纹图谱，并且同时一次对银杏酮酯中多种成分进行定量分析。本发明中方法通过指纹图谱和多成分含量测定可以比较全面的反映银杏酮酯中黄酮类和有机酸类成分的现状，提高银杏酮酯中黄酮类和有机酸类成分的质控水平。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种银杏酮酯中黄酮类和有机酸类成分指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：

1)供试品溶液的制备：称取银杏酮酯，加入甲醇水溶液，涡旋提取后，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；

优选地，所述银杏酮酯加入的重量与所述甲醇水溶液加入的体积之比为1：80-120(g/ml)。

更优选地，所述银杏酮酯加入的重量与所述甲醇水溶液加入的体积之比为1：100(g/ml)。

所述银杏酮酯和甲醇水溶液称取时，应当精密称取。

优选地，所述涡旋提取的条件为：提取时间：3-10min；涡旋转速：2500-3000r/min。

更优选地，所述涡旋提取的条件为：提取时间：5min；涡旋转速：2800r/min。

所述涡旋提取是利用涡旋振荡器对样品进行的一种提取方式，通过偏心旋转使试管等容器中的溶剂产生涡流，从而使样品与溶剂充分混合后提取样品中所需成分，该提取方法对于一些难溶解物质也有较好溶解及提取效果。

所述供试品溶液在密闭容器中进行涡旋提取，所述密闭容器为密闭的离心管或试管。

优选地，所述过滤的方式为滤膜过滤方式。更优选地，所述滤膜的孔径为0.45μm。

2)参照品溶液的制备：称取芦丁对照品，加入甲醇水溶液溶解并定容，即得参照品溶液；

优选地，所述参照品溶液中芦丁的CAS号为153-18-4。

优选地，所述参照品溶液中芦丁的浓度为200-300μg/ml。更优选地，所述参照品溶液中芦丁的浓度为250μg/ml。

优选地，步骤1)或步骤2)中，所述甲醇水溶液为10-90v/v％甲醇水溶液。

更优选地，所述甲醇水溶液为10-70v/v％甲醇水溶液。

最优选地，所述甲醇水溶液为60v/v％甲醇水溶液。