[发明专利]一种脱细胞生物羊膜及种以及京尼平交联脱细胞生物羊膜的制备方法

权利要求书

1.一种京尼平交联脱细胞生物羊膜的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

a、制备脱细胞生物羊膜：

(1)取羊膜，用甲醇-氯仿混合溶液浸泡22-24h，所述混合溶液中甲醇与氯仿的体积比为1:1～1:3，纯化水或去离子水清洗；

(2)用0.5～1％(w/v)十二烷基硫酸钠溶液浸泡22～24h，纯化水或去离子水清洗；

(3)用0.25～0.5％(w/v)胰蛋白酶溶液消化22～24h，纯化水或去离子水清洗；

b、取步骤a制备的脱细胞生物羊膜，浸泡于浓度为0.2％～1％的京尼平溶液中，35～40℃恒温下作用0.5～72h，纯化水或去离子水清洗；

c、病毒灭活，纯化水或去离子水清洗，真空冷冻干燥，即可。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述混合溶液中甲醇和氯仿的体积比为1:1；所述浸泡的时间为24h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述十二烷基硫酸钠溶液的浓度为0.5％(w/v)；所述浸泡的时间为24h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述胰蛋白酶溶液的浓度为0.25％(w/v)；所述消化时间为24h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)、(2)和(3)中，纯化水和去离子水清洗的次数为3次。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤b中，京尼平溶液的浓度为0.4％。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤b中，所述京尼平溶液是含有京尼平的枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液，其pH为4.0；或者含有京尼平的磷酸盐缓冲溶液，其为pH7.4。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤b中，温度为40℃；作用时间为24h；纯化水和去离子水清洗的次数为3次。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤c中，病毒灭活采用过氧乙酸(0.18％)-乙醇(4.8％)混合溶液浸泡灭活，灭活时间为4～72h，优选为24h。

10.权利要求1～9任意一项所述方法制备的京尼平交联脱细胞生物羊膜。