[发明专利]一种辅助检测肉乳兼用牛胴体组成性状的方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明提供一种辅助检测肉乳兼用牛胴体组成性状的方法，同时还提供了其专用试剂盒，用于牛PSAP基因作为辅助选择标记的筛查体系和条件，属于检测试剂盒领域。

背景技术

中国西门塔尔牛是我国于20世纪五十年代引进后自主培育的大型肉乳兼用品种，以其独特的生产性能和良好的肉用特点在中国平原、草原、山区等地区被广泛推广，并表现出其作为新的肉乳兼用型牛品种的巨大优势和发展潜力，成为国内饲养最多，范围最广的兼用牛品种，是目前我国肉牛产业化生产中的主导品种。随着人们生活水平的提高，对牛的产肉性能的要求越来越高，对优质高档牛肉的需求也越来越大，因此优质牛肉带来的可观经济效益决定了肉牛育种中肉质性状选择的重要性。胴体性状作为由微效多基因控制的数量性状，由于无法活体测定而且受到传统育种方法的限制，因此从基因水平，利用新分子遗传标记筛查应用对肉乳兼用牛胴体组成性状进行研究成为主要技术手段，实现对优良种牛选育和改良目的。

鞘脂激活蛋白原（prosaposin,PSAP)基因含有15个外显子，编码4个以串联形式排列，处于同一通读框中的4种鞘脂激活蛋白:saposinA、saposinB、saposinC、saposinD。在小鼠、大鼠和人中均存在三种PSAPmRNA的剪接本：不含外显子8、含6bp的外显子8和含9bP完整的外显子8。而牛的机体中仅存在两种PSAPmRNA的剪接本：不含外显子8和含完整外显子8。PSAP基因的选择性剪接具有组织特异性，不同形式的剪接体存在于不同的组织中。PSAP蛋白通过水解酶加工形成四种saposin蛋白，后者主要作用于溶酶体区室，促进鞘脂的分解代谢。另外在神经以及其它质膜上也有分布，细胞质膜上的鞘脂分解产生亲脂性中间体，中间体参与把细胞外信号传入细胞内的调控过程。PSAP蛋白在生命活动中发挥重要功能，因此PSAP基因的遗传标记可能作为肉牛育肥前筛选优良胴体组成性状的分子标记。

发明内容

本发明提供了一种辅助检测肉乳兼用牛胴体组成性状的方法及试剂盒，解决当前对肉牛胴体性状和肉质性状相关的重要分子遗传标记筛查的难题。

本发明所述的一种辅助检测肉乳兼用牛胴体组成性状的方法，解决方案如下：

以中国西门塔尔牛PSAP基因特异性SNP位点设计一对引物，进行严格的PCR反应体系进行样品的PCR扩增和电泳，并根据测序结果筛查出SNPs遗传标记，进行单倍型分析，判定出阳性个体。

本发明所述的一种辅助检测肉乳兼用牛胴体组成性状的的方法，其特征在于中国西门塔尔牛特异性SNPs位点为：

如核苷酸序列如序列表SeqIDNO.1所示，在序列表SeqIDNO.1第132bp处的SNP位点G>A（rs42143937），第229bp处的SNP位点C>T(rs381104888)，第341bp处的C>T(rs385887193)，第380bp处的SNP位点C>T(rs209315330)，第480bp处的SNP位点C>T(rs432651539)，第486bp处的SNP位点C>G(rs133441330)。

本发明所述的一种辅助检测肉乳兼用牛胴体组成性状的的方法，其特征在于中国西门塔尔牛PSAP基因的特异性引物为：

正向引物F：5′-TTACTGCGAGGTGTGCGAGTT-3′；

反向引物R：5′-CCTCGGCATCACACGGACT-3′。

本发明还公开了一种牛胴体和肉质性状选择的的分子检测试剂盒，本试剂盒包括上述一对特异性引物和PCR扩增引物及与牛胴体性状高度相关的单倍型判定标准。

本发明的积极效果在于：可用于种用肉牛早期选择，进行针对乳肉兼用牛胴体性状的遗传标记筛选。只需要采集少量牛血液或组织（尾部亦可），进行基因组DNA提取，使用该分子检测试剂盒检测，测序后可鉴定肉牛样本群体中胴体和肉质性状的SNPs遗传标记，进行单倍型分析后，PSAP基因功能作用区域的6个SNPs位点及其单倍型组合可以作为一种辅助检测肉乳兼用牛胴体性状的有效分子遗传标记。PSAP基因引物片段及SNPs位点单倍型组合Hap2和Hap6能够作为检测和预示乳肉兼用牛胴体组成性状的专用试剂盒。可以作为肉乳兼用牛种质资源创制中优良个体的早期选择和产业化生产中入栏前育肥牛的筛查和生产。

附图说明

图1为中国西门塔尔牛PSAP基因引物对PCR扩增产物电泳图；

图2为本中国西门塔尔牛资源群体测序获得的PSAP基因SNPs。

具体实施方式