[发明专利]一种辅助检测肉乳兼用牛胴体组成性状的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种辅助检测肉乳兼用牛胴体组成性状的的方法，其特征在于：

核苷酸序列如序列表SeqIDNO.3所示，在序列表SeqIDNO.3第132bp处有G>A突变，第229bp处有C>T突变，第341bp处有C>T突变，第380bp处有C>T突变，第480bp处有突变C>T，第486bp处有C>G突变。

2.一种辅助检测肉乳兼用牛胴体组成性状的的方法及专用试剂盒，其特征在于，

设计扩增如权利要求1所述的肉乳兼用牛PSAP基因遗传标记的引物对，得到的引物序列如下所示：

P正向引物F：5′-TTACTGCGAGGTGTGCGAGTT-3′，

P反向引物R：5′-CCTCGGCATCACACGGACT-3′。

3.一种辅助检测肉乳兼用牛胴体组成性状的的方法及专用试剂盒，其特征在于，

从肉乳兼用牛血液中提取基因组DNA，根据PSAP基因序列设计引物，得到的引物序列如权利要求2所述；

用所示的特异性引物在肉乳兼用牛基因组中进行PCR扩增，PCR产物纯化、克隆测序，获得如序列表SEQIDNO.3所示的核苷酸序列，其中分别包括PSAP基因I10-65G>A、I10-162C>T、I10-274C>T、I10-313C>T、E11-87C>T和E11-93C>G的单核苷酸碱基突变，并且利用测序、分型方法对肉乳兼用牛群体中PSAP基因6个SNPs进行了检测。

4.如权利要求2所述肉乳兼用牛胴体组成性状SNPs和单倍型的检测方法，其特征在于：

所述的PCR扩增条件是：50μL反应体系，包括：上、下游引物（10μmol/L）1μL；Mix（天根）25μL；DNA模板（50ng/μL）2μL；超纯水21μL；

所述的PCR扩增反应程序为：94℃变性5min；94℃变性30s，63℃退火30s，72℃延伸40s，进行30个循环；最后72℃延伸10min。

5.如权利要求3所述肉乳兼用牛胴体组成性状的的方法及专用试剂盒，其特征在于：

根据SNPs位点的遗传距离和连锁分析，本肉乳兼用牛资源筛查到的6个SNPs共有16中单倍型组合（Haplotype），在本资源群体中高频率存在的有6种单倍型组合，分别为：hap1：ACCCCC（0.168）、hap2：ACCTCC（0.122）、hap3：GCCCCC（0.261）、hap4：GCCCGC（0.169）、hap5：GCCTCC（0.042）、hap6：GTTCCC（0.192）；其中单倍型组合Hap2和Hap6能够作为检测和预示乳肉兼用牛胴体组成性状的专用试剂盒。