[发明专利]一种野生山桃稠李组织培养方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养方法，具体为一种野生山桃稠李组织培养方法。

背景技术

山桃稠李正名为斑叶稠李(学名：Padusmaackii(Rupr.)Kom)小乔木，高4-10m。叶椭圆形，菱状卵形、稀有矩圆状倒卵形，长4-8cm，叶缘具不规则带腺锐锯齿，背面沿中脉被短柔毛，被紫褐色腺体。总状花序，基部无叶。花白色，多花密集；花柱和雄蕊近等长。果近球形，径5-7mm，紫褐色。花期4-5月，果期6-10月。润肥沃的砂质壤土上生长良好，萌蘖力强，病虫害少。喜光也耐阴，抗寒力较强，怕积水涝洼，不耐干旱瘠薄，在湿润肥沃的砂质壤土上生长良好，萌蘖力强，病虫害少。随着对园林绿化树种种类以及质量的需求与日俱增，山桃稠李的发展前景十分广阔。

黑龙江省林业科学研究所在2009年-2014年在黑龙江省内的林区进行了大量的调查，发现黑龙江省林区野生的山桃稠李具有良好的抗逆性，并且树干笔直，枝叶茂盛，花期果期都很长，是优良的园林绿化树种。

2009年在黑龙江省哈尔滨市区，黑龙江省林业科学研究所苗圃进行了扦插繁殖，成活率非常低。所以，又进行了种子繁殖实验，成活率相对高些，但是，出苗率仍然很低，苗木成本非常高。而且，有性繁殖很难保存原生母本的优良特性。国内目前，针对黑龙江省林区的野生山桃稠李的组织培养还没有系统的研究。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于设计提供一种野生山桃稠李的组织培养方法的技术方案，该方法采用不定芽增殖途径，经过不定芽增殖、壮苗、生根过程，直接建立试管苗再生体系，该方法操作简单，繁殖系数高，有效保存了野生山桃稠李的特异种质资源的母本遗传信息，为选育山桃稠李的新品系奠定基础。

本发明的一种野生山桃稠李组织培养方法，它是按照以下步骤进行的：

一、外植体的选取：外植体选取野外山桃稠李植株；

二、外植体消毒：取带顶芽的侧芽作为外植体剪成4～5cm的带芽茎段，采用洗衣粉清洗干净，然后再用清水冲洗1～2h；置于超净工作台上用体积百分含量为75％的乙醇浸泡30s，用无菌水冲洗3次，放在无菌滤纸上风干，再用质量百分含量为0.1％升汞消毒8min，然后用无菌水冲洗3次；

三、初代培养：将消毒外植体剪成1cm左右的茎段接入初代培养基中培养，培养条件为：培养温度为20～24℃，光照强度为2000lx，光照时间每天12h，培养30天；所述初代培养基由改良WPS培养基+浓度为1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+浓度为0.5mg/L的萘乙酸组成；

四、不定芽的增殖培养：将初代培养的带芽茎段接入增殖培养基中培养，培养条件为：培养温度为20～24℃，光照强度为2000lx，光照时间每天12h，培养周期为40天；所述增殖培养基由改良WPS+浓度为1.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+浓度为0.5mg/L的萘乙酸组成；

五、壮苗培养：将在增殖培养基中培养至长度达到1cm以上的不定芽逐个切下，接入1/2改良WPS培养基中培养，培养条件为：培养温度为20～24℃，光照强度为2000lx，光照时间每天12h，培养周期为40天；

六、生根培养：将壮苗培养基中的健康健壮的芽接入生根培养基中培养，培养条件为：培养温度为20～24℃，光照强度为2000lx，光照时间每天12h，培养30天；所述的生根培养基由1/4改良WPS培养基+浓度为0.5mg/L的萘乙酸组成；

所述的改良WPS培养基由大量元素、微量元素、铁盐和有机成分组成：

所述的大量元素为：(1)浓度为400mg/L的硝酸铵、(2)浓度为190mg/L的硝酸钾、(3)浓度为170mg/L的磷酸二氢钾、(4)浓度为370mg/L的硫酸镁、(5)浓度为684mg/L的硝酸钙；

所述的微量元素为：(1)浓度为27.85mg/L的硫酸亚铁、(2)浓度为37.28mg/L的乙二胺四乙酸盐；

所述的铁盐为：(1)浓度为22.5mg/L的硫酸锰、(2)浓度为8.6mg/L的硫酸锌、(3)浓度为0.25mg/L的硫酸铜、(4)浓度为6.2mg/L的硼酸、(5)浓度为0.25mg/L的钼酸钠；

所述的有机成分为：(1)浓度为0.1mg/L的盐酸硫胺素、(2)浓度为0.5mg/L的盐酸吡哆辛、(3)浓度为0.5mg/L的烟酸、(4)浓度为2.0mg/L的甘氨酸、(5)浓度为100mg/L的肌醇。

本发明包含以下有益效果：