[发明专利]一种野生山桃稠李组织培养方法

权利要求书

1.一种野生山桃稠李组织培养方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：

一、外植体的选取：外植体选取野外山桃稠李植株；

二、外植体消毒：取带顶芽的侧芽作为外植体剪成4～5cm的带芽茎段，采用洗衣粉清洗干净，然后再用清水冲洗1～2h；置于超净工作台上用体积百分含量为75％的乙醇浸泡30s，用无菌水冲洗3次，放在无菌滤纸上风干，再用质量百分含量为0.1％升汞消毒8min，然后用无菌水冲洗3次；

三、初代培养：将消毒外植体剪成1cm的茎段接入初代培养基中培养，培养条件为：培养温度为20～24℃，光照强度为2000lx，光照时间每天12h，培养30天；所述初代培养基由改良WPS培养基+浓度为1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+浓度为0.5mg/L的萘乙酸组成；

四、不定芽的增殖培养：将初代培养的带芽茎段接入增殖培养基中培养，培养条件为：培养温度为20～24℃，光照强度为2000lx，光照时间每天12h，培养周期为40天；所述增殖培养基由改良WPS+浓度为1.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+浓度为0.5mg/L的萘乙酸组成；

五、壮苗培养：将在增殖培养基中培养至长度达到1cm以上的不定芽逐个切下，接入1/2改良WPS培养基中培养，培养条件为：培养温度为20～24℃，光照强度为2000lx，光照时间每天12h，培养周期为40天；

六、生根培养：将壮苗培养基中的健康健壮的芽接入生根培养基中培养，培养条件为：培养温度为20～24℃，光照强度为2000lx，光照时间每天12h，培养30天；所述的生根培养基由1/4改良WPS培养基+浓度为0.5mg/L的萘乙酸组成；

所述的改良WPS培养基由大量元素、微量元素、铁盐和有机成分组成：

所述的大量元素为：浓度为400mg/L的硝酸铵、浓度为190mg/L的硝酸钾、浓度为170mg/L的磷酸二氢钾、浓度为370mg/L的硫酸镁和浓度为684mg/L的硝酸钙；

所述的微量元素为：浓度为27.85mg/L的硫酸亚铁和浓度为37.28mg/L的乙二胺四乙酸盐；

所述的铁盐为：浓度为22.5mg/L的硫酸锰、浓度为8.6mg/L的硫酸锌、浓度为0.25mg/L的硫酸铜、浓度为6.2mg/L的硼酸和浓度为0.25mg/L的钼酸钠；

所述的有机成分为：浓度为0.1mg/L的盐酸硫胺素、浓度为0.5mg/L的盐酸吡哆辛、浓度为0.5mg/L的烟酸、浓度为2.0mg/L的甘氨酸和浓度为100mg/L的肌醇。

2.根据权利要求1所述的一种野生山桃稠李组织培养方法，其特征在于步骤一中选取野外山桃稠李植株是指：选取当年萌发的带顶芽的侧芽茎段为野外山桃稠李植株，将野外采集的山桃稠李植株置于低温保温箱里储存，备用。

3.根据权利要求1所述的一种野生山桃稠李组织培养方法，其特征在于步骤二中外植体消毒：将采集的小枝条去掉不用的部分，剪成4～5cm的带芽茎段，置于放有洗衣粉水的烧杯里，用纱布网将烧杯口套住，用手不断晃动烧杯5min，将烧杯用流水冲洗1～2h。

4.根据权利要求1所述的一种野生山桃稠李组织培养方法，其特征在于步骤三、四和五中的培养基中分别加入浓度为20g/L蔗糖和浓度为6.5g/L琼脂，培养基pH用氢氧化钠调节至6.0。

5.根据权利要求1所述的一种野生山桃稠李组织培养方法，其特征在于步骤三中所述的初代培养过程中进行预防褐化。

6.根据权利要求5所述的一种野生山桃稠李组织培养方法，其特征在于进行预防褐化是指在第一次接种至培养瓶内后，每隔3天就换瓶一次，一共三次。

7.据权利要求1所述的一种野生山桃稠李组织培养方法，其特征在于1/4改良WPS培养基是指大量元素加入量为权利要求1改良WPS培养基的1/4体积，微量元素、铁盐和有机成分与权利要求1改良WPS培养基一致。

8.据权利要求1所述的一种野生山桃稠李组织培养方法，其特征在于1/2改良WPS培养基是指大量元素加入量为权利要求1改良WPS培养基的1/2体积，微量元素、铁盐和有机成分与权利要求1改良WPS培养基一致。