[发明专利]分离式DNA支点介导的链置换反应用于17β-雌二醇的检测方法及检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种分离式DNA支点介导的链置换反应用于17β‑雌二醇的检测方法及检测试剂盒。试剂盒包括缓冲体系和核酸序列A、B、C、D、E和F，序列A是17β‑雌二醇的核酸适体，能与之特异性结合，把A‑B双链的B置换下来；B与C、D形成B‑C‑D复合物；利用B‑C‑D中的DNA支点，与E‑F反应，启动链置换反应，可把修饰荧光基团的核酸从与修饰淬灭基团的核酸的结合中置换下来，从而发出较强的荧光。本发明操作简单、经济实惠、无需固定洗涤分离过程，适于快速检测，适于在基层推广，具有广泛的应用价值。本发明方法具有较高的灵敏度，可检测到0.3 nM的17β‑雌二醇，线性范围为1 nM到400 nM。

技术领域

本发明属于环境污染物检测领域，涉及一种分离式DNA支点介导的链置换反应用于17β-雌二醇的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

17β-雌二醇是一类典型的环境污染源，广泛存在于河流、土壤、水源、大气以及农产品中，属于环境雌激素，是一种作用最强烈、最具潜在危害的内分泌干扰物，可模拟内源性雌激素行为。17β-雌二醇一般以痕量存在，传统的检测方法主要是液相色谱法、气质联用法、液质联用法等。但这些质谱色谱技术需要麻烦的样品预处理过程，需要昂贵的分析仪器，检测时间较长，难以实现快速分析。

因此，开发一种操作简单、成本低廉、可快速检测在环境的17β-雌二醇的方法以及相关检测试剂盒具有重要意义。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明的目的在于建立一种分离式DNA支点介导的链置换反应用于17β-雌二醇的检测方法及检测试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

一种分子检测试剂盒，包括核酸序列、缓冲体系；核酸序列由核酸序列A、B、C、D、E和F组成；其中序列A为待测分子的核酸适体；A中的部分序列与B互补；序列B具有a区和b区；序列C具有a*区和c区；序列D具有d区和b*区；序列E具有c*区和d*区；E的一端修饰有荧光基团或淬灭基团；序列F具有c区；F的一端修饰有与E对应的淬灭基团或荧光基团；其中上述a、b、c、d区分别与a*、b*、c*、d*区序列互补配对。

优选的，a、b、c区序列的长度独立为9～21个碱基。

优选的，序列D的d区域可作为DNA支点，其序列长度为4-10个碱基。

优选的，荧光基团包括FAM、Cy3、Cy5。

优选的，淬灭基团包括BHQ、金纳米颗粒、量子点、石墨烯。

优选的，缓冲体系为含盐离子浓度的缓冲体系。

一种17β-雌二醇检测试剂盒，包括核酸序列、缓冲体系，其特征在于：核酸序列由核酸序列A、B、C、D、E和F组成，其中

序列A：5'-GCTTCCAGCTTATTGAATTACACGCAGAGGGTAGCGGCTCTGCGCATTCAATTGCTGCGCGCTGAAGCGCGGAAGC-3'（SEQ ID NO：1）；

序列B:5'-TGCGCAGAGCCGCTA( b )CCCTCTGCGTGTAAT( a )-3'（SEQ ID NO：2）；

序列C:5'-ATTACACGCAGAGGG( a* )AACTGCTAGCTTCAG( c )-3'（SEQ ID NO：3）；

序列D:5'-AGCTAC( d )TAGCGGCTCTGCGCA( b* )-3'（SEQ ID NO：4）；

序列E:5'-FAM-CTGAAGCTAGCAGTT（ c*）GTAGCT（ d*）-3'（SEQ ID NO：5）；

序列F:5'-AACTGCTAGCTTCAG（c）-BHQ-3'（SEQ ID NO：6）。