[发明专利]香菇C91-3菌株的Latcripin-9基因片段、编码蛋白、制备方法及用途

说明书

本发明公开一种香菇C91‑3菌株的Latcripin‑9基因片段、编码蛋白、制备方法及用途，Latcripin‑9基因片段核苷酸序列如SEQ ID NO：1 所示；编码蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的。Latcripin‑9基因片段的制备方法按如下步骤进行：提取香菇C91‑3菌株的菌丝体总RNA；将菌丝体总RNA反转录合成cDNA；PCR扩增目标基因：以所得到的cDNA为模板、以具有EcoRⅠ/XhoⅠ两个酶切位点的PCR反应引物进行PCR反应；回收纯化DNA片段。

技术领域

本发明涉及一种从香菇C91-3菌株中提取的Latcripin-9基因片段、编码蛋白、制备方法及用途，所编码的蛋白具有诱导肿瘤细胞凋亡、调节机体免疫力、调节细胞周期、抗肿瘤、清除自由基及染料废水脱色等功能。

背景技术

真菌富含多种生物活性分子，包括核糖体失活蛋白、抗真菌蛋白、凝集素、泛素样蛋白、多糖和激酶。其中的抗肿瘤成分以不良反应少、疗效显著等优点在肿瘤治疗方面具有独到之处。香菇菌C91-3属真菌为担子菌亚门担子菌纲侧耳科，该菌种已于2013年保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.7354。香菇菌C91-3含有健脾益气，扶正祛邪，增强机体免疫力，防治癌症等功效。[Zhao C，Sun H，Tong X，et a1．An Antitumor lectin from edible Mushroom Agrocybe aegerita[J]．Biochem J，2003，374：321—327]。香菇菌C91-3发酵液中含有多种蛋白成分，通过动物体内实验证实有些蛋白成分具有较好的抗肿瘤作用[黄敏，宁安红，张卓然等．香菇C91-3菌丝发酵液小鼠体内抗肿瘤作用的研究[J]．中国微生态学杂志，1996，8(3)：38-40]。体外实验也证实，其发酵液中的一些蛋白组分具有诱导肿瘤细胞凋亡的能力[戴兵,黄敏,宁安红.香菇C91-3菌丝发酵液蛋白抑制小鼠宫颈癌细胞株U14生长及诱导凋亡的实验研究.浙江医学，2004，26（9）；656 -658]。虽然目前已有关于从香菇C91-3菌中提取可诱导肿瘤细胞凋亡的基因片段、编码蛋白及制备方法的相关报道，但是不同的基因片断的作用效果不尽相同，亟待开发更多的表达蛋白药效强、靶向性好、具备产业价值的香菇C91-3cDNA的基因片段。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种从香菇C91-3菌株中提取的Latcripin-9基因片段、编码蛋白及制备方法，所编码的蛋白具有诱导肿瘤细胞凋亡、调节机体免疫力、调节细胞周期、抗肿瘤、清除自由基及染料废水脱色等功能。

本发明的技术解决方案是：一种香菇C91-3菌株的Latcripin-9基因片段，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO：1 所示。

一种如权利要求1所述香菇C91-3菌株的Latcripin-9基因片段编码蛋白，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

一种如权利要求1所述香菇C91-3菌株的Latcripin-9基因片段的制备方法，其特征在于依次按如下步骤进行：

a.提取香菇C91-3菌株的菌丝体总RNA；

b.将菌丝体总RNA反转录合成cDNA；

c.PCR扩增目标基因：

以所得到的cDNA为模板、以具有EcoRⅠ和XhoⅠ两个酶切位点的PCR反应引物进行PCR反应；所述PCR反应引物序列如下：

上游引物EcoRⅠ：