[发明专利]香菇C91-3菌株的Latcripin-9基因片段、编码蛋白、制备方法及用途

权利要求书

1.一种香菇C91-3菌株的Latcripin-9基因片段，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO：1 所示。

2.一种如权利要求1所述香菇C91-3菌株的Latcripin-9基因片段编码蛋白，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一种如权利要求1所述香菇C91-3菌株的Latcripin-9基因片段的制备方法，其特征在于依次按如下步骤进行：

a.提取香菇C91-3菌株的菌丝体总RNA；

b.将菌丝体总RNA反转录合成cDNA；

c.PCR扩增目标基因：

以所得到的cDNA为模板、以具有EcoRⅠ和XhoⅠ两个酶切位点的PCR反应引物进行PCR反应；所述PCR反应引物序列如下：

上游引物EcoRⅠ：

5'-TATCGGATCCGAATTCGTCTTTCTACTTGCATCAG-3'

下游引物XhoⅠ：

5'-GGTGGTGGTGCTCGAGGTTTGCGTTATTCGCCCAG-3' ；

d.回收纯化DNA片段：

将所得到的PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，纯化792bpMarker附近的明

显条带，切胶回收DNA片段。

4.根据权利要求3所述香菇C91-3菌株的Latcripin-9基因片段的制备方法，其特征在于所述a步骤是取培养18天的香菇C91-3菌株的菌丝体，于研钵中加入液氮充分研磨，加入Trizol后室温静置30min，样品融化后继续研磨至裂解液透明状，室温静置5min后，12000r/min离心5min，将上清转移至另一离心管中，然后加入1/5体积氯仿，温和振荡后，4˚C,12000 r/min离心，15 min；吸取上层水相溶液并转移至另一离心管中，加入等体积异丙醇，混匀后室温静置15 min，再次4˚C，12000 r/min离心，10 min，弃上清，然后加入75%乙醇洗涤并干燥，最后用DEPC处理水溶解，得到香菇C91-3菌株的菌丝体总RNA。

5.根据权利要求4所述香菇C91-3菌株的Latcripin-9基因片段的制备方法，其特征在于所述c步骤的PCR反应体系50 µl： cDNA模板1 µl，上游引物0.5 µl，下游引物0.5 µl，dNTP Mixture 4 µl、5×PrimeSTAR Buffer 10 µl、2.5 U/µl 的PrimeSTAR HS DNAPolymerase0.5 µl、灭菌蒸馏水33.5 µl；反应条件：98℃变性10 s，55℃复性10 s，72℃延伸1 min，30个循环；72℃延伸5 min；4℃冷却10 min。

6.一种如权利要求2所述香菇C91-3菌株的Latcripin-9基因片段编码蛋白在制备抗宫颈癌、抗喉癌、抗氧化或抗衰老药物中的应用。

7.一种如权利要求2所述香菇C91-3菌株的Latcripin-9基因片段编码蛋白在染料废水脱色中的应用。