[发明专利]一种基因分型检测方法

权利要求书

1.一种基因分型检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将待测基因加入PCR反应液中形成混合液并封闭在PCR反应板上进行PCR扩增反应，所述PCR反应液中包含待测基因的扩增引物和特异性探针、以及内参照引物和内参照探针，所述特异性探针和所述内参照探针的5’端用荧光基团标记且3’端用淬灭基团标记，在所述PCR扩增反应前读取所述混合液的本底荧光值，在PCR扩增反应结束后读取反应后的荧光值；

(2)将所述反应后的荧光值减去所述本底荧光值，若增值大于等于90％，则判定所述待测基因为阳性，若增值小于90％则判定所述待测基因为阴性。

2.如权利要求1所述的基因分型检测方法，其特征在于：所述PCR扩增反应采用不对称扩增。

3.如权利要求1所述的基因分型检测方法，其特征在于：各个所述特异性探针上的荧光基团以及所述内参照探针上的荧光基团均不同；所述荧光基团从以下群组中选择：FAM、HEX、TET、ROX、TAMRA和CY5；所述淬灭基团为Dabcyl。

4.如权利要求1-3任意一项所述的基因分型检测方法，其特征在于：所述待测基因为ABO基因的O1、O2、B、A、A2基因型，所述扩增引物为通用于所述O1、O2、B、A、A2基因的引物，序列如下：

GF：5’-ATATATATGGCAAACACAGTTAACCCAATG-3’

GR：5’-CCACTCACGGATTTCTGTTGTGTTTC-3’；

所述内参照引物的序列为：

IF：5’-CAGTGCCTTCCCAACCATTCCCTTA-3’

IR：5’-ATCCACTCACGGATTTCTGTTGTGTTTC-3’；

所述O1、O2、B、A、A2基因的特异性探针以及所述内参照探针分别如下：

PO1：5’FAM-TAAGTGGAAGGATGTCCTCGTCGTG-Dabcyl3’

PO2：5’HEX-AGTGGACGTGGACATGGAGTTCC-Dabcyl3’

PB：5’TET-AGTGGACGTGGACATGGAGTTCC-Dabcyl3’

PA：5’TAMRA-CCGACCCCCCGAAGAGCC-Dabcyl3’

PA2：5’ROX-TGCCTTCCCAACCATTCCCTTA-Dabcyl3’

PI：5’CY5-CAGGCAGTACCCGTTCAAGC-Dabcyl3’。

5.如权利要求1-3任意一项所述的基因分型检测方法，其特征在于：所述待测基因为HLA-B27基因，所述扩增引物的序列如下：

SF：5’-GATCAGGACGAAGTCCCAGGCC-3’

SR：5’-CATCTCGGCGTCTGAGGAGA-3’；

所述内参照引物的序列为：

IF：5’-CAGTGCCTTCCCAACCATTCCCTTA-3’

IR：5’-ATCCACTCACGGATTTCTGTTGTGTTTC-3’；

所述HLA-B27基因的特异性探针以及所述内参照探针分别如下：

PS：5’FAM-TGTCGGGTCCTTGTTCCAGGAT-Dabcyl3’

PI：5’HEX-CCCACATCAGGTACAGGCTT-Dabcyl3’。

6.如权利要求4所述的基因分型检测方法，其特征在于：所述PCR反应液中还包括缓冲液、热启动酶、dNTP、水和氯化镁，所述PCR扩增反应的程序如下：96℃预变性15分钟；95℃变性15秒，65℃复性20秒，72℃延伸20秒，循环30次；72℃再延伸5分钟。

7.如权利要求5所述的基因分型检测方法，其特征在于：所述PCR反应液中还包括缓冲液、热启动酶、dNTP、水和氯化镁，所述PCR扩增反应的程序如下：96℃预变性15分钟；95℃变性15秒，55℃复性20秒，72℃延伸20秒，循环30次；72℃再延伸5分钟。